癌における糖鎖合成酵素の遺伝子発現と臨床応用

糖链合酶基因在肿瘤中的表达及临床应用

基本信息

批准号：
03151002
负责人：
牧田章
金额：
$ 10.11万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.アスパラギン糖鎖のbisectを形成するGlcNAc転移酵素III(GnT III)をラット腎から精製した。この酵素の部分アミノ酸配列に基づきcDNAをクロ-ニングし、酵素蛋白(62KDa)の一次構造を推定した。その結果、N端近傍に膜貫通領域があり、構造既知の糖転移酵素と全体的構造は似ているが、一次構造上のhomologyはなかった。このcDNAをCOSー1やHeLa細胞にトランスフェクトして活性の発現を確かめた(論文投稿中)。GnT IIIは肝癌や胎児肝では発現していたが、成人肝ではしていなかった。2.癌患者体液に出現することが知られているβ1ー4Gal転移酵素(GT)の変異型(GTーI)の本態を明らかにした。即ち、先ずGTーIに特異的なモノクロン抗体を作製した。GTのcDNAの様々な欠損変異株をE.coliで発現し、GTーI抗体で検索した。その結果、GTーIはN端側の膜貫通領域を欠失した酵素であること、GTーI抗体は欠失酵素のN端側をエピト-プとすることが分かった。これによって、患者から精製したGTーIの特異な性質との対応が明らかになった。3.ヒト腎細胞癌で亢進する糖脂質硫酸化酵素は、細胞レベルで蛋白キナ-ゼC(PKC)の阻害剤やTPAによって著明な活性低下が起きた。TPAの作用はPKCをdownregulateする結果とみられ、本酵素の発現はPKCによって調節されることが分かった。他方、本酵素はEGFによって上昇するが、PKC阻害剤やTPAで前処理すると上昇はみられず、EGFによる誘導効果もPKCを介することを見出した。4.ラット肝癌や悪性変換細胞では共通して2→6シアル酸転移酵素が亢進する。癌では本酵素のmRNAはサイズ、量とも正常と大差はないが、本酵素蛋白は自己シアル酸化と部分ペプチドの解離を受けた活性型が癌で増加しており、翻訳後修飾が癌で本酵素の活性化をもたらす。

1。形成天冬糖蛋白糖链的一分点的GlcNAC转移酶III（Gnt III）从大鼠肾脏中纯化。根据该酶的部分氨基酸序列将cDNA变为黑色，并估计了酶蛋白（62KDA）的一级结构。结果，n附近有一个膜穿透区域，整体结构与结构结构化的糖旋转酶相似，但是由于主要结构而没有同源性。该cDNA在COS -1和HeLa细胞上转染以检查活性的表达（发布论文）。 GNT III在肝癌和胎儿肝脏中表达，但在成年肝脏中没有做到。 2。已知出现在癌症患者体液中的β1-4GAL转移（GT）的状态已被揭示。换句话说，首先产生了特定于GT -I的单色抗体。 GT cDNA中的各种缺陷在大肠杆菌中表达，并用GT -I抗体进行搜索。结果，发现GT-I是一种在N端侧的膜穿透区域损失的酶，而GT-I抗体使用丢失酶的N端一侧。这揭示了对从患者纯化的独特GT -I对特殊特性的响应。 3。通过细胞水平的蛋白质kina-Za C（PKC）的抑制剂和TPA显着降低了人类肾细胞癌增强的酶。 TPA的作用被认为是PKC下调的结果，发现该酶的表达是通过PKC调节的。另一方面，这种酶由EGF升高，但发现先前用PKC抑制或TPA治疗时没有发现上升，并且EGF的诱导作用是通过PKC。 4。大鼠肝癌和恶性转化细胞通常通过2至6个唾液酸元素增强。在癌症中，这种酶的mRNA与大小和数量没有太大不同，但是该酶蛋白增加了具有自氧化的活性类型的数量，并且与癌症分离的部分肽，并且翻译后的翻译是癌症激活酶。