再構成系とin vitro実験系による大腸菌蛋白質膜透過の分子機構の解析

利用重构系统和体外实验系统分析大肠杆菌蛋白膜渗透的分子机制

基本信息

批准号：
02680153
负责人：
徳田元
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680153/
关键词：
蛋白質の膜透過再構成実験系プロトン駆動力大腸菌海洋細菌

项目摘要

反転膜小胞を用いたin vitro蛋白質膜透過系において、以下の成果が得られた。1.分子内にジスルフィド結合を持った前駆体蛋白質は、大腸菌の膜を透過するためにプロトン駆動力が必須となることを見いだした。2.大腸菌の蛋白質膜透過反応において、プロトン駆動力はATPに対する親和性を高める作用を持っていることを見いだした。3.大腸菌蛋白質膜透過反応において、ATPとプロトン駆動力の役割に関してこれまでに得られた知見を総合し、モデルを提出した。4.海洋性好塩細菌Vibrio alginolyticusの反転膜小胞において、蛋白質膜透過のin vitro実験系を構築し、大腸菌のSecA蛋白質が顕著に反応を促進することを見いだした。またこの系において、プロトン駆動力ではなく、Na^+駆動力が重要であることを見いだした。大腸菌の蛋白質膜透過系の再構成実験系において、以下の成果が得られた。1.細胞質膜をオクチルグルコシドで可溶化後、希釈によってオクチルグルコシドを除きリポゾ-ムに組み込み、蛋白質の膜透過系を再構成する方法を確立した。2.SecE蛋白質を精製し、これが膜透過の必須の因子であることを明らかにした。3.Secy蛋白質を精製し、蛋白質膜透過装置の必須因子であることを証明した。また、膜透過装置の基本単位は、SecE、Secy、SecAの3者のみで構築できることを明らかにした。

使用倒膜囊泡在体外蛋白质膜渗透系统中获得以下结果。 1。我们发现，质子驱动力对于分子内具有二硫键的前体蛋白至关重要，以渗透到大肠杆菌的膜。 2。在大肠杆菌的蛋白质膜渗透反应中，发现质子驱动力具有增加对ATP的亲和力的作用。 3。我们已经编制了有关ATP和质子驱动力在大肠杆菌蛋白膜渗透反应中的作用并提交模型的知识。 4。我们在海洋卤素细菌的倒膜囊泡中构建了一个体外实验系统，以实现蛋白质膜渗透，并发现大肠杆菌的Seca蛋白会显着促进反应。还发现在该系统中，Na^+驱动力很重要，而不是质子驱动力。在实验系统中获得了以下结果，以重建大肠杆菌的蛋白质膜渗透系统。 1。用辛基糖苷溶解细胞质膜后，通过稀释度去除辛基糖苷，并掺入脂质体中，以建立一种重建蛋白质膜渗透性的方法。 2。纯化SECE蛋白以揭示它是膜渗透的重要因素。 3。纯化Secy蛋白，被证明是蛋白质膜透化剂的重要因素。它还揭示了膜通透器的基本单位只能由三方构建：Sece，Secy和Seca。