蛋白質工学の手法により生産された蛋白質の構造に関する研究

利用蛋白质工程方法生产蛋白质的结构研究

基本信息

批准号：
63890008
负责人：
太田隆久
金额：
$ 17.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

蛋白質の構造解析についてはリゾチ-ムについて特に非線形的動きを基準振動変数の動きとして記述する方法を開発し、メリチンを用いた解析により蛋白質中の低振動の協奏的な運動に及ぼす溶媒の効果を定量的に議論する道を開き、また、基準振動変数をパラメ-タ-とする蛋白質X線結晶解析の新しいリファインメントの方法を開発した(郷)。蛋白質の立体構造の熱安定性解析のため、蛋白質の構造の水和からの寄与と分子を構成する原子間の相互作用からの寄与を原子の接触表面積の変化に比例するものとして計算する方法を確立し蛋白質の構造安定性の概略を予測することに成功した(大井)。蛋白質の溶液内での構造決定と検定については ^<13>Cー ^<15>N二重標識と全 ^<15>N標識と2次元HMQCーNOESY、3次元NOESYーHMQCによるDNA結合蛋白質CROのプロトンの帰属とNOEによる2次、3次構造情報からの構造決定に成功し(京極)、また蛋白性プロテア-ゼインヒビタ-SSIについて ^<13>Cーラベル法を用い、位置特異的アミノ酸変異体を利用することにより全カルボニル炭素の帰属を決定する方法を確立した(甲斐荘)。蛋白質工学により生産された蛋白質の構造についてはプロキモシンCR601変異体のN末端の2番目のアミノ酸のリフォ-ルディングにおける寄与をこの残基を置換することで解析し、構造の再生過程の効率にはリジン残基が深く関与していることを明かにし(別府)、ビフィズス菌のLー乳酸脱水素酵素をポリエチレングリコ-ルを用いて結晶化させ、X線結晶解を行い、アロステリック解果がサブユニット相互間の接触の変化を通じて生じ、変異酵素においてはその効果が高活性型あるいは低活性型のいずれかに固定されることで生じることを確かめた(太田)。SSIの各種変異体を用いて機能に対する構造の寄与を測定した(三浦)。

关于蛋白质的结构分析，我们开发了一种将非线性运动描述为参考振荡变量的运动的方法，并为通过使用梅利替金分析蛋白质对蛋白质的低振荡协调运动的影响开辟了道路，并开发了一种将蛋白质X-ray Crystallogrich occillography occillations（Go）参数（作为参数）的新方法（也开发出一种新方法）。为了对蛋白质的三维结构进行热稳定性分析，我们已经建立了一种方法来计算蛋白质结构水合的贡献以及构成分子与原子接触表面积的变化成比例的原子之间的相互作用，并成功预测了蛋白质（OI）的结构稳定性的概述。为了确定溶液中蛋白质的结构测定和测定，我们通过 ^<13> c - ^<15> n双重标记，成功地分配了DNA结合蛋白CRO的质子，所有 ^<15> n标记，2d HMQC-Noesy，3d noesy-HMQC-和NON NON NOTIARY INSTIRAL SEDICTIAN and NOTIAN and Inno and Inno and and agok yeog的结构确定（ky）使用位置特异性氨基酸突变体对蛋白质蛋白质 - Zeinhivita-SSI使用 ^<13> c标记方法（kaisou）来归因。 The structure of the protein produced by protein engineering was analyzed by substituting this residue to refold the second amino acid at the N-terminus of the prochymosin CR601 mutant, revealing that lysine residues are deeply involved in the efficiency of the structure regeneration process (Beppu), and the L-lactic dehydrogenase of bifidobacterium is crystallized using polyethylene glycol, and进行了X射线结晶，以确认通过亚基之间的接触改变发生变构分辨，并且突变酶的作用固定在高度活性或低活动形式（OTA）上。 SSI的各种突变体用于测量结构对功能的贡献（Miura）。