スフィンゴリピドーシスの遺伝子異常の解析・

鞘脂沉积症的遗传异常分析

基本信息

批准号：
63570362
负责人：
辻省次
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570362/
关键词：
スフィンゴリピドーシスサンドホフ病ゴーシェ病遺伝子変位 PCR

项目摘要

精神発達遅滞、local panatrophyという従来知られていなかった新しい臨床型を呈する若年型Sandhoff病を見いだしその分子遺伝学的な解析を行なってきている。酵素学的な解析から、ヘキソサミンダーゼβサブユニットの欠損を証明した。本疾患における分子レベルでの異常を明らかにすることを目的として、分子遺伝学的な解析を行なった結果、患者ゲノムDNAのサザーン解析では、遺伝子の大きな決失等は見い出せず、その遺伝子異常は、サザーン解析では明らかにできないpoint mutationである可能性が高いと考えられた。患者皮慮線維芽細胞を培養しmRNAを抽出後ノーザン解析を行ったところ、ヘキソサミンダーゼβサブユニットmRNAが激減していることが判明した。従来の研究成果から考えて、エクソン部分のpoint mutationによるnon-sense mutationあるいはmis-sense mutationである可能性が高いと考えられ、遺伝子増幅法(polymerase chain reactioni以下PCRと省略)により増幅された遺伝子の塩基配列を、サブクローン化する〜エクソンの塩基配列を決定している。もう一つのスフィンゴリピドーシスであるゴーシェ病の遺伝子異常については、本研究代表者が、現在までに2つのpoint mutation (^<444>Leu→Pro)、(^<370>Asn→Ser)を明らかにしてきている。このうち前者は、NciIという制限酵素の断片長多型により検出できるが、後者の変異は制限酵素では検出できない。この場合PCRを用いるのが最善の方法であるが、ゴーシェ病では相同性の非常に高いpseudogeneが存在することが障害になっていた。そこでこのpseudigeneの塩基配列を解析し、その欠失部位を利用してfunctional geneのみが増幅できる方法を確立し、^<370>Asn→Serの検出が容易に行える方法を確立した。

精神发育延迟，局部全生粒，是一种未知的新临床类型，并且一直在进行其分子遗传分析。酶分析证明了己酰胺β亚基的缺陷。由于分子遗传分析是为了阐明该疾病分子水平异常的目的，患者基因组DNA分析没有发现基因的主要损失，并且可能发现其基因异常。是点突变，这在sazarn分析中尚不清楚。在培养患者皮肤成纤维细胞和执行mRNA后，进行了北部分析，发现己糖酰胺ββ子单位mRNA大大降低。従来の研究成果から考えて、エクソン部分の点突变による非义突变あるいは失去义突变である可能性が高いと考えられ、遗伝子増幅法（聚合酶链反应以下PCRと省略）により増幅された遗伝子碱的基础序列被确定为子克隆 - 远期的基础序列。关于Gosche疾病的基因异常，这是另一种自旋戈尔层病，该研究代表揭示了两个点突变（^<444> Leu→Pro），（^370> ASN→Ser）。前者可以通过NCII的碎片聚合物的长度（受限的酶）检测到，但是无法用受限的酶检测到后者。在这种情况下，使用PCR是最好的方法，但是Gache病具有很高的同源假基因的阻碍。因此，我们分析了该假基因的基本序列，建立了一种只能使用丢失位点扩增功能基因的方法，并建立了一种可以轻松检测^<370> asn→Ser的方法。