プランク法を応用したヒト免疫不全ウイルス(HIV)の変異に関する基礎的研究

使用普朗克方法进行人类免疫缺陷病毒（HIV）突变的基础研究

基本信息

批准号：
63015036
负责人：
原田信志
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

エイズの原因ウイルスであるヒト免疫不全ウイルス(HIV)は、その分離株の遺伝的性状から、非常に変異しやすいウイルスと考えられている。我々は、プラック法を用いて、このHIVをクローニングした。遺伝子構造およびその形質の点で、単一と思われるウイルスARV-C-1を選んだ。このウイルスを再クローニングする事により、プラックの形質(大きさ)が異なる2種のウイルス;ARV-C-1-3とARV-C-1-11を得た。さらにクローニング実験をくり返した。その結果、これらの子孫クローンウイルスの形質は、親のそれを引き継ぎ、同一であった。しかし、得られた数十株のクローンウイルスの遺伝子構造を制限酵素切断地図を用いて解析すると、かなりの頻度で変異が発生している事がわかった。その変異率は0.6〜1.2×10^<-2>/年と計算された。この値は、患者から得られた種々の分離株から推定された値に近似していた。以上の結果から、プラック形成法のようにHIVを継代する実験では、このウイルスは、in vitroでもかなりの頻度で変異すると考えられた。以上の実験結果から、HIVの変異をin vitroで捉え、解析するには、プラック法が最適と思われた。しかし、さらに詳細な検討を行うためには、目的とする遺伝子部位の塩基配列を決定する必要があると思われた。現在、同様の手法を用いて、中和抗体から逃れる変異ウイルスを試験管内で証明しようと試みている。また、温度感受性変異ウイルスの作製も検討中である。これらの実験には、プラック法が重要な役割を果たすと考えられる。

人类免疫缺陷病毒（HIV）是一种导致艾滋病的病毒，由于其分离菌株的遗传特性，人们认为它具有高度变异性。我们使用噬菌斑方法克隆了这种艾滋病毒。我们选择了 ARV-C-1，这是一种在遗传结构和性状方面似乎独特的病毒。通过重新克隆该病毒，我们获得了两种具有不同噬斑特征（大小）的病毒：ARV-C-1-3和ARV-C-1-11。重复进一步的克隆实验。结果，这些后代克隆病毒的特征继承了其父母的特征并且是相同的。然而，当使用限制性酶切图谱对获得的数十种克隆病毒的基因结构进行分析时，发现突变发生的频率相当高。计算出突变率为0.6-1.2×10^-2/年。该值接近从患者获得的各种分离株估计的值。基于以上结果，认为在使用空斑形成法传代HIV的实验中，该病毒即使在体外也非常频繁地突变。基于上述实验结果，空斑方法似乎是体外捕获和分析HIV突变的最佳方法。然而，为了进行更详细的研究，似乎有必要确定靶基因位点的核苷酸序列。他们目前正在使用类似的技术来证明体外突变病毒能够逃脱中和抗体。我们还在研究对温度敏感的突变病毒的创建。 Plack 方法被认为在这些实验中发挥着重要作用。