ＡＬＳにおける変異型ＳＯＤ１に共通の構造変化に着目した新規治療薬の基盤開発

新治疗药物的基础开发，重点关注 ALS 中突变型 SOD1 常见的结构变化

基本信息

批准号：
13J10826
负责人：
山口奈美子
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J10826/
关键词：
ALS SOD1 Derlin-1 アデノ随伴ウイルス単鎖型抗体亜鉛

项目摘要

私は， SOD1-Derlin-1結合阻害物質をマウス個体内に発現させる系を確立し，その系を用いてモデルマウスの病態改善効果を検討することを目的とし，研究を遂行した．昨年度までに，アデノ随伴ウイルス（AAV: adeno-associated virus）ベクターを用いてALSモデルマウス（家族性ALS関連変異型SOD1のトランスジェニックマウス）脊髄の運動神経にCT4ペプチド（Derlin-1のC末端12アミノ酸，SOD1との結合領域）を発現させる系を構築し，ALS発症時期と継続期間の検討を行った．しかしながら，いずれの表現型においてもCT4ペプチド発現による有意な改善効果は見られなかったことに加え，種々の条件検討を行った結果，アストロサイトやミクログリアにCT4ペプチドを発現させる系が必要であると判断した．以上に基づき，本年度は下記のとおり研究を遂行した．・脳室内投与により，マウス個体の脊髄アストロサイト・ミクログリアへCT4ペプチドを発現させる目的に適した血清型のAAVベクターから，ウイルスを作製する系を構築した．・上記アデノ随伴ウイルスを，ALSモデルマウス胎児（生後1日）の脳室内に打ち込むことで，5週齢までにCT4ペプチドを脊髄アストロサイトおよびミクログリアに発現する系を構築した．・上記により，5週齢以降で体重・運動機能評価（ロータロッドテスト）を行うことで，ALS病態改善効果の解析を進めた．・昨年度までに，文献調査によりALSの原因として確からしいと判断した原因遺伝子および変異型のクローニングを行い，これらの変異型の中から野生型SOD1のDerlin-1との結合，およびSOD1の構造変化（Derlin-1結合領域の露出）を引き起こすものを抽出するための免疫沈降法スクリーニング系を構築した．以上に基づき，本年度は，実際にスクリーニングを遂行した．

我进行研究的目的是建立一个在小鼠个体中表达SOD1-Derlin-1结合抑制剂的系统，并利用该系统来检查改善模型小鼠病理状况的效果。直到去年，我们还使用腺相关病毒（AAV）载体注射CT4肽（C端12），构建了表达氨基酸（与SOD1结合区域）的系统，并研究了ALS发作的时间和持续时间。然而，除了在任何表型中都没有观察到CT4肽表达的显着改善效果之外，并且作为检查各种条件的结果，我们发现在星形胶质细胞和小胶质细胞中表达CT4肽的系统是必要的。决定了。基于上述情况，今年我们开展了以下研究。 - 我们从适合通过脑室内给药在个体小鼠的脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞中表达CT4肽的血清型AAV载体构建了病毒生产系统。 - 通过将上述腺相关病毒注射到ALS模型小鼠胎儿（1天大）的心室中，我们构建了一个系统，其中CT4肽在5周龄时在脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞中表达。 - 基于上述，我们在5周龄后进行体重和运动功能评估（转棒试验），分析改善ALS病理的效果。・截至去年，我们通过文献研究克隆了可能导致ALS的致病基因和突变型，并从这些突变型中研究了野生型SOD1与Derlin-1的结合以及结构我们构建了免疫沉淀筛选系统来提取引起（Derlin-1 结合区域暴露）的物质。基于以上情况，我们今年实际上进行了筛选。

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

ケルヒリピートタンパク質 KLHDC10 の SMA 病態に関連した SMN のユビキチン化を介した新規制御機構

SMN泛素化介导的Kerch重复蛋白KLHDC10与SMA病理相关的新调控机制

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
M. Nomoto;H. Tsukagoshi;T. Mori;T. Suzuki;M.J. Skelly;N. Oka;T. Matsushita;M. Tokizawa;Y.Y. Yamamoto;T. Higashiyama;S.H. Spoel;Y. Tada;○山口奈美子，関根悠介，関根史織，一條秀憲
通讯作者：
○山口奈美子，関根悠介，関根史織，一條秀憲

ケルヒリピートタンパク質 KLHDC10の全身性炎症反応症候群 (SIRS) における新規機能の解析

Kerch重复蛋白KLHDC10在全身炎症反应综合征（SIRS）中的新功能分析

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
石橋賢;宮田一乗;○山口奈美子，関根悠介，関根史織，一條秀憲
通讯作者：
○山口奈美子，関根悠介，関根史織，一條秀憲

TNFα誘導性SIRSにおける急性炎症制御因子としてのKLHDC10の新規機能

KLHDC10 在 TNFα 诱导的 SIRS 中作为急性炎症调节剂的新功能

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Takayasu Yoshikawa;Mamoru Tamura;Nguyen Duy Vy;Shiho Tokonami;Takuya Iida;○山口奈美子，関根悠介，関根史織，一條秀憲
通讯作者：
○山口奈美子，関根悠介，関根史織，一條秀憲

TNFα誘導性SIRSにおける急性炎症制御因子としてのケルヒリピートタンパク質KLHDC10の新規機能

Kälch 重复蛋白 KLHDC10 作为 TNFα 诱导的 SIRS 中急性炎症调节剂的新功能