予後不良骨髄異形成症候群におけるNR4A3のエピジェネティック制御異常の解明

阐明预后不良的骨髓增生异常综合征中 NR4A3 表观遗传调控异常

• 批准号: 26870103
• 负责人: 武藤 朋也
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26870103/
• 关键词: NR4A3; エピジェネティクス; DNAメチル化

癌抑制遺伝子NR4A3は急性骨髄性白血病においてその発現が低下していると報告されているが、その発現低下のメカニズムは現在のところ解明されていない。エピジェネティック制御異常による癌抑制遺伝子の発現抑制はよく知られており、本研究で着目したNR4A3もエピジェネティック制御異常であるDNA高メチル化が発現抑制の原因になっていると仮説をたて研究を行った。まず、複数の白血病細胞株のNR4A3の発現を確認したところ、予想通り全ての細胞株で健常CD34陽性骨髄単核細胞と比べ、NR4A3の発現が低下していた。次に、NR4A3のプロモーター領域のDNAメチル化状態をDNAバイサルファイトシーケンシング法を用いて評価したところ、予想に反しコントロールと比べて有意なDNAメチル化の異常は確認されなかった。次に、転写開始地点より下流のCpGサイトのDNAメチル化状態を評価したところ、転写開始地点より約5kb下流のCpGサイトでコントロールに比べ高メチル化している部位を同定した。このDNA高メチル化がNR4A3発現低下に関与しているかどうかを評価するために、DNAメチル化阻害剤であるdecitabineを投与した。decitabineの投与により全ての細胞株で細胞増殖抑制効果を認めるとともに、NR4A3の発現抑制解除が認められた。さらに、decitabine投与後の細胞でDNAバイサルファイトシーケンシングを行ったところ、HL60、K562ではDNAの脱メチル化が生じており、NR4A3発現低下におけるDNA高メチル化の関与が示唆された。一方で、TF-1、KASUMI、U937などではdecitabine投与後のDNA脱メチル化は認められなかった。したがって、細胞遺伝学的異常によってNR4A3発現低下のメカニズムは異なっていると推察された。

据报道，急性髓样白血病的癌症抑制基因的表达已下降，但目前尚未阐明表达下降的机制。众所周知，由于表观遗传控制引起的癌症抑制基因的表达控制是众所周知的，而针对这项研究的NR4A3也是一个假设，即DNA高甲基化是表达抑制的原因，这是表达抑制的原因完成了。首先，当确认多个白血病细胞的NR4A3的表达时，如预期的那样，所有细胞中NR4A3的表达均降低，这是预期的，预期的是健康的CD34阳性CD34阳性阳性骨髓单核细胞。接下来，使用DNA Bysalfight测序方法评估了NR4A3启动子区域的DNA甲基化状态。接下来，当评估转移起始点下游的CpG位点的DNA甲基化状态时，与对照相比，发现CPG位点约5KB和下游的CPG位点。施用了DECITABINE，一种DNA甲基化抑制剂，以评估该DNA高甲基化是否参与NR4A3表达的降低。德替滨的给药识别所有细胞中细胞生长的影响，并缓解了NR4A3的指示。此外，当施用Decitabine时，在DNA抗DNA时进行了DNA Bissal战斗测序时，HL60和K562的DNA去除DNA时，提出了NR4A3表达降低的DNA高甲基化。另一方面，在分解替滨给药后不允许删除DNA，TF-1，Kasumi，U937等。因此，据推测，由于细胞遗传异常而导致的NR4A3表达的机理不同。

项目成果

Reduced expression of tumor suppressor NR4A3 through aberrant epigenomic modifications in AML

通过异常表观基因组修饰减少 AML 中肿瘤抑制因子 NR4A3 的表达

• 发表时间: 2014
• 作者: Ryoh Shimizu;Tomoya Muto;Chika Kawajiri;Emi Togasaki;Atsuko Yamazaki;Yasumasa Sugita;Shio Sakai;Yusuke Takeda;Naoya Mimura;Masahiro Takeuchi;Chikako Ohwada;Emiko Sakaida;Tohru Iseki;Koutaro Yokote;Atsushi Iwama;Chiaki Nakaseko
• 通讯作者: Chiaki Nakaseko