神経難病発症に関わる異常スプライシングの分子機構解明とその制御法開発

阐明异常剪接参与难治性神经疾病发生发展的分子机制并开发控制方法

基本信息

批准号：
15030233
负责人：
今泉和則
金额：
$ 4.1万
依托单位：
University of Miyazaki (2004)Nara Institute of Science and Technology (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030233/
关键词：
スプライシング神経変性疾患タウプレセニリン SRタンパク質 Bcl-xl SMN1

项目摘要

実験計画に従って、前頭側頭型痴呆症原因遺伝子タウエクソン10の異常スプライシング制御機構の解明を目指した。さらに孤発性アルツハイマー病脳で高頻度に発現するプレセニリン2のエクソン5が欠損したスプライシング変種の発現機序、Bcl-xlの酸化ストレス時におけるスプライシング変化についても解析した。1.前頭側頭型痴呆症原因遺伝子タウのエクソン10のスプライシング制御機構:タウ遺伝子のエクソン10の5'側から12-45ntにスプライシングエンハンサー活性があること、その領域にSR関連タンパク質であるTra2β、SF2/ASF、SRp30cが直接的および間接的に結合し、エクソン10のスプライシングを制御することを明らかにした。その研究成果を論文にした(Kondo et al., Genes to Cells, 2004)。2.プレセニリン2のエクソン5が欠損したスプライシング変種の発現機序:エクソンの3'末端には核タンパク質HMGA1aが、5'側には未知の約30kDaタンパク質が直接結合し、異常スプライシングを起こすことを証明した。5'側のシス配列に結合する因子をRNA結合能を指標に動物細胞核抽出液から精製を試みている。3.神経芽細胞SK-N-SH、HeLa細胞、293細胞に、過酸化水素H2O2もしくはNO供与体SIN-1を用いて酸化ストレスを与えた。Bcl-xの選択的スプライシング産物をRT-PCRにて検出し、アポトーシス抑制型であるBcl-xLとアポトーシス促進型であるBcl-xSの存在比を比較したところ、酸化ストレスによってBcl-xS型のmRNAが増加していた。これは酸化抑制剤であるa-トコフェロールによって抑制された。現在、このスプライシング制御に関わる因子の同定を試みている。

在实验设计之后，我们旨在阐明陶氏10的异常剪接控制的机制，陶氏10的基因，导致额颞痴呆。此外，我们还分析了缺少Presenilin 2的外显子5的剪接变体的表达机制，该变体在剪接大脑中经常表达，并在Bcl-XL的氧化应激期间剪接变化。 1。额颞痴呆基因的外显子10的剪接控制机制：我们透露，在12-45nt的Tau基因的5'外显子10侧有剪接增强剂活性，并且与SR相关的蛋白质Tra2β，SF2/ASF和SRP30C与该区域的互联10个区域相结合。发表在论文中（Kondo等人，基因到细胞，2004年）。 2。带有presenilin的外显子5的剪接变体的表达机制：已证明核蛋白HMGA1A直接与外显子的3'末端结合，而未知的大约30 kDa蛋白直接与5'侧结合，从而导致异常拼接。使用与5'侧的顺式序列作为RNA结合能力的指数结合的因子，尝试从动物细胞核提取物中进行纯化。 3。使用过氧化氢H2O2或没有供体SIN-1，对神经细胞SK-N-SH，HeLa细胞和293个细胞进行氧化应激。通过RT-PCR检测到Bcl-X的替代剪接产物，并比较了Bcl-XL的丰度比，A抑制性凋亡类型和BCL-XS（比较）促凋亡类型，并且由于氧化应激而增加了Bcl-XS的mRNA，BCL-XS的mRNA，一种促凋亡类型。氧化抑制剂A托酚抑制了这种情况。目前，我们正在尝试确定剪接控制中涉及的因素。