クロロウイルス感染における初期遺伝子発現

氯病毒感染的早期基因表达

基本信息

批准号：
15028213
负责人：
山田隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

・クロロウイルスCVK2感染初期遺伝子の同定と発現解析ウイルス感染後、5-10minの間にウイルス初期遺伝子が発現する。最初期に発現する遺伝子計23個を同定し、その発現パターンと特異的プロモータ構造を解析した。初期遺伝子には、TFIIB,mRNA capping enzyme,helicase,transcription factors等転写に関係する因子、aa-tRNA synthetases,ribosomal proteins等翻訳関係因子、その他各種代謝系に関係する酵素がコードされていた。これら各々の感染における役割の確定が興味深い問題である。クロロウイルス感染初期転写の特徴は、感染後40minでそのパターンが大きく切り替わる事である。すなわち当初poly(A)付加されるmRNAは感染後40min以降は全くpoly(A)を失う。転写開始、終結が40min以降は極めてルーズになり、readthroughが頻繁に起こる。感染後、早期に生成される宿主細胞表面ヒアルロン酸、キチンは、宿主細胞を一時的に外環境より保護する意義があると思われる(論文発表)。・クロロウイルスCVK2のコードする新奇細胞壁分解リアーゼの解析ウイルスが宿主細胞壁を特異的に分解するには複数の酵素活性が必要であり、これまでに3種の多糖加水分解酵素遺伝子をウイルスゲノム上に同定してある。さらに未知ORFが宿主溶解活性があることを見いだしvAL-1と命名した。GST-融合タンパク質として大腸菌で生成したvAL-1を用いて、宿主細胞壁を分解し生成オリゴ糖をMALDI-TOFF-MASSスペクトロメトリーで解析した。その結果、この酵素はC2位に側鎖を持つグルクロン酸のβ結合を脱離反応で切断するリアーゼ活性を有することが判明した。既知のリアーゼとは諸性質を異にし酵素学的にも興味深い酵素である(論文発表)。また、切断基質となる糖鎖構造もまたユニークであり、このウイルスの宿主特異性を考える上で重要な情報となる。

・早期基因和表达分析病毒感染的叶绿体CVK2感染鉴定，病毒初始基因在5-10min之间表达。在最早的时期鉴定了二十个基因仪，并分析了表达模式和特定启动子结构。最初的基因包括与翻译相关的因子，例如TFIIB，mRNA限制酶，解旋酶，转录因子，例如翻译因子，AA-tRNA合成，核糖体蛋白质和其他代谢系统。确定在每种感染中的作用是一个有趣的问题。叶绿体初始转移的特征是该模式在感染后40分钟大大切换。也就是说，最初添加的mRNA在感染后40分钟后失去了聚（A）。转移启动，40分钟后的末端非常松动，并且经常出现通读。透明质酸和几丁质是在感染后尽早产生的，对于暂时保护宿主细胞而言，与外部环境（已发表的论文）更为重要。 -Clorovirus CVK2的新动物壁分解RIASE分析病毒特异性拆卸宿主壁需要多种酶活性，到目前为止，三种类型的多糖水解酶基因已经在病毒renom上已经鉴定出来。此外，发现未知的ORF溶解在宿主中，并被命名为Val-1。使用在大肠杆菌中产生的Val-1作为GST融合蛋白，分解了宿主细胞壁，并通过MALDI-TOFF-MAS质谱法分析了产生的寡糖。结果，发现该酶的后酶活性切割了葡萄糖酸的β-束，该葡萄糖酸在C2中具有侧链，并具有戒断反应。它是一种与已知的罪行不同的酶，也是一种有趣的酶（论文公告）。另外，糖链结构是切割底物，也是独特的，这是考虑该病毒特殊性的重要信息。