蛋白質安定化機能を持つ新規p27^<kip1>結合因子の癌化抑制への関与

具有蛋白质稳定功能的新型 p27^<kip1> 结合因子参与抑制癌症形成

基本信息

批准号：
15024227
负责人：
内田千晴
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024227/
关键词：
ユビキチンプロテアソーム p27 細胞周期 E1A

项目摘要

[研究目的]CDK阻害タンパク質p27^<Kipl>(以下、p27と略)、真核生物の細胞周期抑制機構におけるキーファクターの1つとして重要視されてきた。p27の量あるいは機能の低下は、細胞周期進行の促進による細胞の異常な増殖を引き起こし、ひいては悪性癌形質獲得の要因となると考えられていた。したがってこのタンパク質の機能制御機構を明らかにすることは、癌細胞の悪性化形質形成の一因を知るために非常に重要である。我々はこの点に焦点をあて、p27の安定性制御に関わると予想される。2種の新規p27結合因子p27NBP1-2をクローニングした。本研究では、これら新規因子の細胞内機能の解析を通して、細胞の悪性化のメカニズムを解明することを目的とした。[方法と結果]p27NBP1はE3ユビキチンリガーゼであり、p27を基質とし、プロテアソーム依存的に不安定化することがin vivo assayで示された。酵母two-hybrid法によって、p27NBP1と結合する蛋白質p27ALIP、p27ARN等が同定された。p27NBP1はp27ALIPをユビキチン化して不安定化に導いたが、p27ARNの安定性に対しては影響を与えなかった。細胞の免疫染色法により、p27NBP1は単独では細胞内全体に、p27と共発現させると主に核に局在することが分かった。また、フローサイトメトリーで解析した結果、p27NBP1の発現は、S期で高い傾向を示した。以上の結果から、p27NBP1はS期におけるp27の分解制御に関わる新規のユビキチンリガーゼである可能性が示唆された。p27NBP2はE1A結合タンパク質であることが分かっており、E1Aはp27とp27NBP2との結合を阻害した。現在p27NBP2安定発現細胞株およびノックダウン細胞株を準備中であり、p27NBP2が細胞内在性p27の安定性、細胞周期、細胞増殖速度等に与える影響を調べる予定である。

[研究目的] CDK抑制剂蛋白p27^<kipl>（以下简称为p27）被认为是真核生物细胞周期抑制机制中关键因素之一。据认为，p27的数量或功能的减少可能导致由于促进细胞周期进展，因此导致了异常的细胞增殖，因此是由于获得了恶性癌性状。因此，阐明该蛋白的功能调节机制非常重要，以了解有助于癌细胞中恶性血浆形成的因素。期望我们专注于这一点，并参与P27的稳定性控制。克隆了两个新型的P27结合因子P27NBP1-2。这项研究旨在通过分析这些新因素的细胞内功能来阐明细胞恶性肿瘤的机制。方法和结果：P27NBP1是E3泛素连接酶，P27作为底物，在体内测定中显示以蛋白酶体依赖性方式不稳定。通过酵母两杂化方法鉴定出与P27NBP1结合的蛋白质P27Alip，P27arn等。 P27NBP1泛素化的P27Alip可破坏稳定，但对P27arn的稳定性没有影响。细胞免疫染色表明，p27NBP1仅位于整个细胞中，并且与p27共表达时，它主要定位于细胞核。此外，分析后的S相中，p27NBP1的表达很高。以上结果表明，p27NBP1可能是一种新型的泛素连接酶，涉及S相调节P27降解。 P27NBP2已知是E1a结合蛋白，E1a抑制了p27与P27NBP2的结合。目前，正在准备P27NBP2稳定表达细胞系和敲低细胞系，我们计划研究P27NBP2对内源性P27，细胞周期，细胞增殖率等稳定性的影响。