蛋白質安定化機能を持つ新規p27^<kip1>結合因子の癌化抑制への関与

具有蛋白质稳定功能的新型 p27^<kip1> 结合因子参与抑制癌症形成

基本信息

批准号：
15024227
负责人：
内田千晴
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024227/
关键词：
ユビキチンプロテアソーム p27 細胞周期 E1A

项目摘要

[研究目的]CDK阻害タンパク質p27^<Kipl>(以下、p27と略)、真核生物の細胞周期抑制機構におけるキーファクターの1つとして重要視されてきた。p27の量あるいは機能の低下は、細胞周期進行の促進による細胞の異常な増殖を引き起こし、ひいては悪性癌形質獲得の要因となると考えられていた。したがってこのタンパク質の機能制御機構を明らかにすることは、癌細胞の悪性化形質形成の一因を知るために非常に重要である。我々はこの点に焦点をあて、p27の安定性制御に関わると予想される。2種の新規p27結合因子p27NBP1-2をクローニングした。本研究では、これら新規因子の細胞内機能の解析を通して、細胞の悪性化のメカニズムを解明することを目的とした。[方法と結果]p27NBP1はE3ユビキチンリガーゼであり、p27を基質とし、プロテアソーム依存的に不安定化することがin vivo assayで示された。酵母two-hybrid法によって、p27NBP1と結合する蛋白質p27ALIP、p27ARN等が同定された。p27NBP1はp27ALIPをユビキチン化して不安定化に導いたが、p27ARNの安定性に対しては影響を与えなかった。細胞の免疫染色法により、p27NBP1は単独では細胞内全体に、p27と共発現させると主に核に局在することが分かった。また、フローサイトメトリーで解析した結果、p27NBP1の発現は、S期で高い傾向を示した。以上の結果から、p27NBP1はS期におけるp27の分解制御に関わる新規のユビキチンリガーゼである可能性が示唆された。p27NBP2はE1A結合タンパク質であることが分かっており、E1Aはp27とp27NBP2との結合を阻害した。現在p27NBP2安定発現細胞株およびノックダウン細胞株を準備中であり、p27NBP2が細胞内在性p27の安定性、細胞周期、細胞増殖速度等に与える影響を調べる予定である。

[研究目的] CDK抑制蛋白p27^<Kipl>（以下简称p27）已被认为是真核生物细胞周期抑制机制中的关键因子之一。据认为，p27数量或功能的减少通过促进细胞周期进展而导致异常细胞增殖，并且是获得恶性癌症特征的一个因素。因此，阐明该蛋白的功能控制机制对于了解导致癌细胞恶性转化的因素极为重要。我们重点关注这一点，预计会涉及到p27稳定性的调控。克隆了两个新的 p27 结合因子 p27NBP1-2。本研究的目的是通过分析这些新因子的细胞内功能来阐明细胞恶性肿瘤的机制。 [方法和结果] 体内实验表明p27NBP1是一种E3泛素连接酶，它以p27为底物，并以蛋白酶体依赖性方式使其不稳定。使用酵母双杂交方法，鉴定了与 p27NBP1 结合的蛋白质，例如 p27ALIP 和 p27ARN。 p27NBP1 泛素化 p27ALIP，导致其不稳定，但对 p27ARN 的稳定性没有影响。细胞免疫染色显示，p27NBP1单独时定位于整个细胞，但与p27共表达时主要定位于细胞核。此外，流式细胞术分析表明p27NBP1表达在S期趋于高。这些结果表明p27NBP1可能是一种新型泛素连接酶，参与S期p27降解的调节。 p27NBP2 已知是一种 E1A 结合蛋白，E1A 抑制 p27 和 p27NBP2 之间的结合。我们目前正在制备稳定表达p27NBP2的细胞系和敲低细胞系，并计划研究p27NBP2对细胞内源性p27稳定性、细胞周期、细胞增殖率等的影响。