Transposonを利用した神経伝達に関与する遺伝子の単離と機能解明

使用转座子分离神经传递相关基因并进行功能阐明

• 批准号: 63638508
• 负责人: 細野 隆次
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63638508/
• 关键词: アセチルコリン; トランスポゾンタッギング; C.elegans; コリン作動性ニューロン; シナプス終末; トリクロルフォン抵抗性変異体; cDNA; 塩基配列; アセチルコリン; トランスポゾンタッギング; C.elegans; コリン作動性ニューロン; シナプス終末; トリクロルフォン抵抗性変異体; cDNA; 塩基配列

神経細胞終末での神経伝達物の合成、蓄積、放出の制御機構解明を目的として次の成果を得た。1.C.elegans choline作動ニューロンでのacetylcholineの挙動に関与する遺伝子同定法を確立し、14遺伝子を見出した。2.これらの遺伝子の1部は変異によってacetylcholineが異常に蓄積することを発見した。3.こうした遺伝子を単離するため、目的とする遺伝子にtransposonを導入する方法を確立し、この方法で6遺伝子にtransposonを導入することができた。4.transposon Tc1を利用した遺伝子クローニングを行ない、1遺伝子をクローニングした。5.当該遺伝子のcDNAを得た。6.Genomic DNAの1部及びcDNAの全塩基配列を決定した。現在、塩基配列から推定されるアミノ酸を決定し、大型電子計算機によるhomologyの検索を行なっている。また合成ペプチドの作成、発現ベクターへ組み込んだ融合タンパクの精製を準備している。将来これらを用いて抗体を作成し、遺伝子が発現される神経細胞を同定したい。

获得以下结果，目的是阐明控制神经递质合成，积累和释放在神经元末端的机制。 1。秀丽隐杆线虫，我们建立了一种鉴定乙酰胆碱行为中胆碱神经元行为的基因的方法，并发现了14个基因。 2。我们发现，由于这些基因的一部分突变，乙酰胆碱异常积累。 3。为了隔离这些基因，建立了一种将转座子引入靶基因的方法，并且可以使用这种方法将转座子引入六个基因中。 4。使用跨座子TC1进行基因克隆，并克隆一个基因。 5。获得基因的cDNA。 6。确定基因组DNA的一部分和cDNA的整个碱基序列。当前，确定从基础序列推导的氨基酸，并使用大型电子计算机搜索同源物。另外，正在制备合成肽的制备和融合到表达载体中的融合蛋白的纯化。将来，我们希望使用它们来生成抗体来识别表达基因的神经元。