セマフォリンをターゲットとした自己免疫疾患制御の試み

尝试通过靶向信号蛋白来控制自身免疫性疾病

基本信息

批准号：
20060016
负责人：
竹ヶ原宜子
金额：
$ 6.14万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではセマフォリン-セマフォリン受容体を介したシグナルによる自己免疫疾患、骨代謝疾患の制御作用を明らかにするとともに、セマフォリンをターゲットとした自己免疫疾患制御を目指す。昨年までに、骨代謝疾患を担う破骨細胞のモデル細胞であるRAW264.7を用いた解析から、セマフォリン受容体plexin-A1に会合するシグナル伝達分子FARP2が破骨細胞に発現し、破骨細胞分化に関与することを見出している。本年度はドミナントネガティブ型FARP2(ΔGEF-FARP2)をRAW24.7細胞に強制発現させた株化細胞およびFARP2遺伝子欠損マウスを用いてFARP2による破骨細胞多核化制御作用を詳細に検討した。すると、ΔGEF-FARP2細胞を用いた解析から(1)ΔGEF-FARP2細胞では細胞骨格を形成するアクチン繊維構造が変化し、破骨細胞に認められるPodosome-beltの形成が障害されていた。(2)FRET法を用いて時空間的なRacの活性化を検討し、コントロール細胞で認められたpodosome-beltに特異的なRacの活性化がΔGEF-FARP2発現細胞では認められなかった。(3)ΔGEF-FARP2発現細胞はコントロール細胞に比べてインテグリンの活性が高く、細胞外基質に対する接着活性が顕著に高い、ということが明らかになった。また、FARP2欠損マウスを用いて、in vitroにて破骨細胞分化誘導実験を行った。するとFARP2欠損細胞はRANKL刺激による破骨細胞分化マーカーの発現は正常であるにもかかわらず、多核破骨細胞の形成が障害され、FARP2が破骨細胞多核化に重要な分子であることが明らかとなった。

这项研究旨在阐明闪光蛋白 - 异磷酸蛋白受体介导的对自身免疫性疾病和骨代谢疾病的信号，以及控制靶向闪光蛋白的自身免疫性疾病。直到去年，使用RAW264.7的分析是一种负责骨代谢疾病的破骨细胞的模型细胞，发现与词素受体丛蛋白-A1相关的信号分子FARP2在整骨细胞中表达，并参与了骨分化。今年，我们使用在RAW24.7细胞中强行表达的显性负FARP2（ΔGEF-FARP2），详细研究了FARP2在Osteop2基因中使用细胞系和缺乏FARP2基因的小鼠的控制效果。这表明使用ΔGEF-FARP2细胞分析（1）在ΔGEF-FARP2细胞中改变了形成细胞骨架的肌动蛋白纤维结构，从而损害了在骨细胞中发现的足叶的形成。（2）使用FRET方法研究了RAC的时空激活，并且在表达ΔGEF-FARP2的细胞中未观察到对照细胞中Podosombel的RAC激活。（3）据表明，表达ΔGEF-FARP2的细胞比对照细胞具有更高的整联蛋白活性，并且对细胞外基质的粘附活性明显更高。此外，使用FARP2缺陷型小鼠在体外进行了诱导破骨细胞分化的实验。这表明FARP2缺陷型细胞通过RANKL刺激具有正常的破骨细胞分化标记的表达，但是损害了多核破骨细胞的形成，而FARP2是整骨细胞多核化的重要分子。