分裂酵母の細胞質分裂におけるポロキナーゼの役割

波洛激酶在裂殖酵母胞质分裂中的作用

基本信息

批准号：
20058032
负责人：
馬渕一誠
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Gakushuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

分裂酵母収縮環の形成過程:出芽酵母のアクチン結合タンパク質ABP140のアクチン結合ペプチドLifeactと蛍光タンパク質mRubyの融合タンパク質を分裂酵母内に発現させてアクチンを可視化し、分裂過程でのライブイメージングを行った。分裂期に入ると細胞中央部にアクチンの集積が見られ、そこからアクチンケーブルがダイナミックに伸びたり消えたりするのが見られた。やがて1本のケーブルが細胞赤道部で安定化されて収縮環となっていった。この結果は私達が提唱しているアスター様構造-先導ケーブル仮説を指示するものである。さらに蛍光タンパク質GFPとの融合タンパク質の発現により、分裂に必須なforminであるCdc12がアスター様構造の中央に局在することを見た。分裂酵母の分裂シグナル関連因子:分裂酵母のキネシンKlp8は分裂期初期に分裂位置に集まる。Blt1というタンパク質はKlp8と共局在する。Klp8とBlt1との関係について詳細に解析を行うため、klp8blt1二重破壊株を作製した。房が破壊株は細胞長が野生型株より長くなる形質を示したのに対し、二重破壊株では細胞長が長くなる形質がやや抑制されることがわかった。Klp8のモーター活性に必須のATP結合部位に変異を入れた変異株においてもblt1破壊株との二重変異による形質の抑制が見られた。Klp8を野生型株で過剰発現すると曲がった細胞が増加するが、blt1破壊株でKlp8を過剰発現すると、さらに多くの細胞が異常形態を示した。以上のことから、Klp8は細胞分裂においてネガティブな機能を持ち、それをBlt1が抑えていることが示唆された。

裂变酵母收缩环的形成过程：肌动蛋白结合蛋白ABP140的肌动蛋白结合肽LIFEACT在裂变酵母中以可视化肌动蛋白表达，并在裂变过程中进行实时成像。当细胞进入有丝分裂阶段时，在细胞的中央部分观察到肌动蛋白的积累，并看到肌动蛋白电缆从那里动态延伸并消失。最终，一根电缆在细胞赤道处稳定，并成为收缩环。该结果决定了我们提出的类似紫色的结构指导的电缆假设。此外，融合蛋白与荧光蛋白GFP的表达表明，cdc12是分裂必不可少的formin，位于星形样结构中心。与裂变酵母尖齿信号有关的因素：裂变酵母驱动蛋白KLP8在早期有丝分裂阶段的裂变位置收集。蛋白BLT1与KLP8共定位。为了对KLP8和BLT1之间的关系进行详细分析，准备了KLP8BLT1双层损害菌株。发现簇绒菌株的性状表现出比野生型菌株更长的细胞长度的性状，而细胞长度在双型菌株中略微抑制的性状。在对KLP8运动活性必不可少的ATP结合位点中包含突变的突变菌株中，还观察到由于双重突变而抑制了具有BLT1破坏菌株的双重突变。 KLP8在野生型菌株中的过表达增加了弯曲细胞的数量，而BLT1破坏菌株中KLP8的过表达显示出更多的细胞形态异常。从以上提出，KLP8在细胞分裂中具有负功能，并且BLT1抑制了此功能。