細胞質分裂の分子機構

胞质分裂的分子机制

基本信息

批准号：
06275101
负责人：
馬渕一誠
金额：
$ 143.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1996
项目状态：
已结题

项目摘要

収縮環形成のシグナル伝達系の因子の候補、低分子量Gタンパク質Rhoに関しては、分裂酵母Rho1が隔壁部に局在すること、Rho2の過剰発現が細胞形状変化や細胞壁の厚化を引き起こすこと、rho3、rho4遺伝子の破壊は細胞極性の異常や分裂異常を引き起こすことを見いだした。もう1つの候補であるミオシン軽鎖のリン酸化については、まずHeLa細胞から3種類のミオシン軽鎖遺伝子を単離した。次にリン酸化ミオシン軽鎖を特異的に認識する抗体を作製し、分裂期のHeLa細胞を染色したところ収縮環が染色された。またミオシン軽鎖のMLCK部位をリン酸化するキナーゼとしてMAPKAK2を同定した。ウニ卵の染色体分離と細胞質シグナル伝達の時間的関係をコルヒチンの顕微注入により調べた。テトラヒメナのEF1_αとF-アクチン結合タンパク質p60が分裂溝に存在することを見い出した。またテトラヒメナの分裂面決定に関与するp85の遺伝子の全塩基配列を決定した。ウニ卵の分裂溝に局在するアクチン調節タンパク質ABP40がアクチン繊維切断活性を持つことを明らかにした。さらにウニ卵の新規のF-アクチン結合タンパク質として見い出したp60とp150が分裂溝に濃縮されることを見た。またアフリカツメガエル卵の分裂に必須なアクチン調節タンパク質XACに結合する5種のタンパク質を見い出し、その1つがWDリピートを持つことを明らかにした。アフリカツメガエル卵のCa放出がIP3を介して行われることを示した。アクチン繊維を細胞膜に結合せさると考えられるERMファミリータンパク質は細胞膜タンパク質の塩基性に富む領域に結合することをICAM-2,IL-2についても確かめた。クラミドモナスのアクチン変異株を単離した。この株は細胞質分裂を正常に行った。

关于低分子量G蛋白Rho，它是收缩环形成信号转导系统中的候选因子，裂殖酵母Rho1定位于隔膜，Rho2的过度表达导致细胞形状改变和细胞壁增厚，而rho3发现rho4 基因的破坏导致细胞极性和分裂异常。关于肌球蛋白轻链磷酸化，这是另一个候选者，我们首先从 HeLa 细胞中分离出三种类型的肌球蛋白轻链基因。接下来，当他们创建了一种特异性识别磷酸化肌球蛋白轻链的抗体并对有丝分裂的 HeLa 细胞进行染色时，收缩环被染色。我们还鉴定出 MAPKAK2 是一种磷酸化肌球蛋白轻链 MLCK 位点的激酶。通过显微注射秋水仙碱研究了海胆卵染色体分离与细胞质信号转导之间的时间关系。我们发现四膜虫 EF1_α 和 F-肌动蛋白结合蛋白 p60 存在于分裂沟中。我们还确定了 p85 基因的完整核苷酸序列，该基因参与确定四膜虫的分裂平面。我们发现，位于海胆卵卵裂沟中的肌动蛋白调节蛋白 ABP40 具有肌动蛋白纤维切断活性。此外，在海胆卵中发现的新型 F-肌动蛋白结合蛋白 p60 和 p150 集中在分裂沟中。他们还发现了五种与肌动蛋白调节蛋白 XAC 结合的蛋白质，这对于非洲爪蟾卵分裂至关重要，并发现其中一种蛋白质具有 WD 重复序列。我们发现爪蟾卵中的 Ca 释放是通过 IP3 发生的。对于 ICAM-2 和 IL-2，还证实了 ERM 家族蛋白（被认为将肌动蛋白纤维与细胞膜结合）与细胞膜蛋白的富含碱性区域结合。分离出衣藻肌动蛋白突变株。该菌株正常进行胞质分裂。