非古典的MHC細胞表面抗原Millの立体構造解析

非经典MHC细胞表面抗原Mill三维结构分析

基本信息

批准号：
20057020
负责人：
前仲勝実
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞表面抗原である主要組織適合性抗原(MHC)の多様なメンバーのうち、特殊な生物学的機能を有するものが非古典的MHCと呼ばれる一群である。最近、見出された新規の非古典的MHCクラスI様分子のMILLファミリー(MILL1およびMILL2)は以下の性質を有することがわかった:(1)ペプチド提示能を有さない、(2)GPIアンカー型分子である、(3)軽鎖(β2ミクログロブリン)に結合する、(4)MILL1は胸腺髄質上皮細胞に発現し、MILL2は免疫系以外のかなり多くの細胞に発現する。しかし、MILLの生理機能の解明は不十分であり、立体構造も決定されていない。そこで、私たちはMILLの立体構造を明らかにすることで、MILLの生理機能を解明することを目指している。昨年度から引き続き、大腸菌発現と巻き戻しにより調製したMILL2の細胞外ドメインの結晶を用いて2.2Åの高分解能データにより構造解析を行った。重原子同型置換法により位相決定後、モデル構築を行った結果、通常のMHCでは見られない大きなドメイン間の構造の柔軟性が観測された。しかし、興味深いことに、β2ミクログロブリンとの会合状態は通常のMHCで見られる配向を維持していた。これらの構造的特徴を踏まえて、MILL特異的レセプターの結合部位を予測した。さらに、MILLと結合することを確認できた細胞群を用いて、先の予測に基づく変異体解析を行った。

在细胞表面抗原的主要组织相容性抗原（MHC）的不同成员中，具有特殊生物学功能的人是一个称为非经典MHC的组。 Recently, the MILL family of novel nonclassical MHC class I-like molecules (MILL1 and MILL2) found were found to have the following properties: (1) no peptide display ability, (2) it is a GPI-anchored molecule, (3) it binds to the light chain (β2 microglobulin), (4) MILL1 is expressed in thymic medullary epithelial cells, and MILL2 is expressed in quite a number of免疫系统以外的细胞。但是，磨坊的生理功能不足，尚未确定三维结构。因此，我们旨在通过阐明磨坊的三维结构来阐明磨坊的生理功能。从去年开始，使用2.2Å的高分辨率数据使用大肠杆菌表达和放松的Mill2的细胞外域的晶体进行结构分析。在使用重原子同构取代的相位测定后，构建了模型，因此，观察到在正常MHC中未见的大域之间结构的柔韧性。然而，有趣的是，与β2微球蛋白的缔合保持了正常MHC中的方向。基于这些结构特征，我们预测了磨坊特异性受体的结合位点。此外，基于先前的预测，使用证实与磨坊结合的细胞进行突变分析。