染色体サイクルの進行に必要な新規テロメア関連蛋白質の探索とその機能解析

寻找染色体周期进展所需的新型端粒相关蛋白及其功能分析

基本信息

批准号：
20055014
负责人：
上野勝
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

Pot1は分裂酵母からヒトまで保存された一本鎖テロメア結合蛋白質で、分裂酵母pot1破壊株のテロメアDNAは急激に消失する。我々はpot1破壊株のテロメア消失がRecQ型ヘリケースrqh1の破壊によって抑圧されること、pot1 rqh1二重変異株は微小管重合の阻害剤であるTBZに感受性になることなどを発見している。そこで本研究はpot1 rqh1二重変異株のTBZ感受性原因解析を目的とした。まず、pot1 rqh1二重変異株が染色体分配すなわちM期の進行に異常があるかどうかを調べるために、微小管に蛍光蛋白質を融合した株を作成し、微小管の伸びる様子をライブ観察した。その結果、pot1 rqh1二重変異株はそれぞれの一重変異株に比べて高い頻度で微小管ののびが遅い細胞があることがわかった。pot1 rqh1二重変異株のテロメアが組換えで維持されていることと、パスルフィールドゲル電気泳動の結果から二重変異株あ染色体末端が絡まっていることが示唆されていることから、染色体末端の絡まりがM期の進行を阻害していると考えている。そこで、この末端の絡まりがテロメア間での組換え中間体かどうかを調べるためにpot1 rqh1二重変異株がRPAフォーサイを持っているかどうかを調べた。そのためにRPAの大サブユニットをコードしたRad11にGFPを融合した株を作成し、ライブ観察を行なった。その結果、二重変異株は、M期の始めから終わりまでRPAフォーサイを持っている細胞の頻度が非常に高いことがわかった

POT1是一种从裂变酵母到人保守的单链端粒结合蛋白，裂变酵母pot1的端粒DNA迅速消失。我们已经发现，POT1中断中的端粒消失被RECQ型解旋酶RQH1的破坏抑制，并且POT1 RQH1双突变体易受到微管聚合抑制剂TBz的影响。因此，这项研究旨在分析POT1 RQH1双重突变体菌株中TBz敏感性的原因。首先，为了研究POT1 RQH1双突变株是否具有异常在染色体分布中，即在M期的进展，创建了一种菌株，该菌株将荧光蛋白融合到微管中，并进行了实时观察以查看如何腐蚀微管。结果表明，与每个单个突变体应变相比，POT1 RQH1双突变体菌株的频率和较慢的微管具有较高的频率和较慢的微管。重组维持了POT1 RQH1双突变菌株的端粒，Pasle场凝胶电泳的结果表明染色体末端是纠缠的，因此我们相信染色体末端的纠缠会抑制M相的进展。因此，为了确定这种末端纠缠是否是端粒之间的重组中间体，我们研究了POT1 RQH1双突变体是否具有RPA Forsy。为此，创建了一种与Rad11融合的菌株，该菌株编码了大型RPA亚基，并进行了实时观察。结果表明，从M相开始到结束时，双突变菌株的携带RPA Forsy的细胞频率很高。