染色体サイクルの進行に必要な新規テロメア関連蛋白質の探索とその機能解析

寻找染色体周期进展所需的新型端粒相关蛋白及其功能分析

基本信息

批准号：
18058016
负责人：
上野勝
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18058016/
关键词：
テロメア分裂酵母 Pot1 染色体ワーナー症候群 RecQヘリケース Taz1

项目摘要

昨年度の研究では、テロメア二本鎖結合タンパク質であるTazlと染色体一本鎖に結合するRPAの二重変異株(taz1Δ rad11-D223Y)のテロメアが消失し、taz1Δ rad11-D223Y rqh1Δ三重変異株のテロメアは維持される事を明らかにしている。そこで年度はpot1Δrqh1Δ二重変異株を作成し、テロメアの有無を調べると共に、pot1Δrqh1Δ二重変異株の性質を調べるごとにより、Pot1とRqh1の機能を明らかにすることを目的とした。その結果、pot1Δrqh1Δ二重変異株のテロメアが一定の確立で維持される事を明らかにした。また、Rqh1のヘリケ-ス活性が無い変異株rqh1-K547Aに形質転換を行いpot1Δrqh1Δ-K547A二重変異株を取得し、この株のテロメアも一定の確立で維持されることがわかった。さらに、pot1Δrqh1Δ二重変異株の染色体の状態を調べるためにPu1sed Fie1d Ge1 Electrophoresis (PFGE)を行い、こめ二重変異株の染色体が線状で維持されている事、染色体構造に異常がある事を明らかにした。この染色体の異常が細胞周期の何処で起こるりかを調べるために、薬剤を用いたSPOT解析を行った結果、この二重変異株は微小管重合阻害剤TBZ感受性であることを明らかにし、Pot1及びRqh1の不在によって染色体分配時に異常が起こる可能性を明ちがにしだ。さらにpot1Δrqh1Δ二重変異株は高温で生育できないことを発見した。pot1Δrqh1Δ二重変異株に相同組換え因子のRhp51を破壊したpot1Δrqh1Δ三重変異株はテロメアが維持されず染色体が環状化することもわかった.

去年的一项研究表明，双链端粒结合蛋白TAZL的端粒和与染色体单链端粒结合的RPA双突变剂（TAZ1ΔRAD11-D223Y）消失了，TAZ1ΔRAD223YRQH1Δtripleant iS nevanttaz1Δadaz1Δad23Yrqh1Δtriple iS triplant themeres andtaz1ΔRAD11-D223Y。因此，在这一年中，目的是通过创建POT1ΔRQH1Δ双突变菌株，检查端粒的存在或不存在，并检查POT1ΔRQH1Δ双突变体菌株的特性来阐明POT1和RQH1的功能。结果，揭示了POT1ΔRQH1Δ双突变株的端粒保持在一定水平。此外，将没有RQH1 HELICE活性的突变菌株RQH1-K547A转化以获得POT1ΔRQH1Δ-K547A双突变株，并发现该菌株的端粒保持在一定水平。此外，还进行了PU1SSED FIE1D GE1电泳（PFGE），以研究POT1ΔRQH1Δ双突变株的染色体状态，表明POT1ΔRQH1ΔRQH1Δ双突变型菌株的染色体线性保持线性并保持染色体结构中的异常。为了研究这种染色体异常在细胞周期中发生的地方，我们使用药物进行了斑点分析，发现该双突变体对微管聚合抑制剂TBZ敏感，很明显，在分布过程中缺乏POT1和RQH1可能导致异常。此外，我们发现POT1ΔRQH1Δ双突变体菌株在高温下无法生长。还发现，将同源重组因子RHP51破坏到POT1ΔRQH1Δ双突变株不维持端粒，并且染色体被循环。