動的クロマチン構造制御の機能複合体解析

动态染色质结构控制的功能复合体分析

• 批准号: 19038019
• 负责人: 田上 英明
• 金额: $ 5.63万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19038019/
• 关键词: 機能複合体; 動的クロマチン制御; ヒストン; ピストン

出芽および分裂酵母において、FLAGI/HAエピトープタグを付加した各種ヒストン遺伝子株を構築し、各種ヒストンと相互作用する因子群を機能複合体として解析した。これまでに、可溶性画分から生理的条件下で免疫沈降することにより、クロマチンへの挿入装置だけでなく、修飾や局在、分解といった動的なヒストンメタポリズムについての関連因子をスクリーニングし、新規クロマチン関連因子も含めてヒストンダイナミクスの一端が明らかとなった。例えば、出芽酵母において、可溶性ヒストンはH3/H4がきわめて少ない。一方、比較的可溶化しやすいH2A-H2B複合体はヒストンシャペロンNap1以外にEACT(Spt16、Pob3)を含むことが明らかとなった。FACTはクロマチン転写を促進する因子として有名であるが、各種阻害剤、細胞固定法など様々な条件で解析することにより、FACTは転写や複製時のみならず、生体内でクロマチンからH2A/H2Bを解離させる働きを持ち、よりグローバルなH2AIH2Bダイナミクスを規定する基盤因子として働くことが示唆される。また、ヒストンH3-H4複合体は出芽酵母、分裂酵母、ヒトの間でかなり異なることが明らかとなり、クロマチン形成の共通の分子基盤と戦略のバリエーションが示唆される。分裂酵母ヒストンH3複合体の主要構成因子の1つとして同定した新規クロマチン因子は、大量発現により染色体分配異常を引き起こす。In vitroにおいてヒストンH3/H4と結合するが、結合領域も新規であり、如何にして特異的にヒストンと相互作用するのか興味深い。また、既知のヒストンシャペロンCIA1(=Asf1)とヒストンを介した相互作用することからも、クロマチン制御の新たな一面が明らかとなりつつある。

在萌芽和裂变酵母中构建了带有FLAGI/HA表位标签的各种组蛋白基因菌株，与各种组蛋白相互作用的因子组被分析为功能复合物。到目前为止，通过在生理条件下可溶性级分的免疫沉淀，我们不仅筛选了插入染色质的装置，还筛选了动态组蛋白化生型的相关因素，例如修饰，定位和降解，以及一些组蛋白动力学，包括新型染色质因子，包括新的染色质因子。例如，在萌芽的酵母中，可溶性组蛋白含有很少的H3/H4。另一方面，已经揭示了相对容易溶解的H2A-H2B复合物除了组蛋白伴侣NAP1外，还含有EACT（ST16，POB3）。事实是促进染色质转录的因素，但通过在各种条件下进行分析，例如各种抑制剂和细胞固定，建议事实可以使H2A/H2B与体内染色体分离，不仅在转录和复制过程中，而且是定义全球H2AIH2B动力学的基本因素。此外，组蛋白H3-H4复合物在萌芽的酵母，裂变酵母和人类之间显然有所不同，这表明在染色质形成的共同分子基础和策略上有变化。一种新型的染色质因子，被确定为裂变酵母组蛋白H3复合物的主要成分之一，导致由于高表达而引起的异常染色体分布。它在体外与组蛋白H3/H4结合，但结合区域也是新颖的，有趣的是它如何专门与组蛋白相互作用。此外，组蛋白介导的与已知组蛋白伴侣CIA1（= ASF1）的相互作用也揭示了染色质调节的新方面。

项目成果

FACTを介した酵母ヒストンH2A/H2Bダイナミクス

通过 FACT 获得酵母组蛋白 H2A/H2B 动态

• 发表时间: 2008
• 作者: 田上英明;加藤麻希;田上英明
• 通讯作者: 田上英明

An oncoprotein from the plant pathogen Agrobacterium has histone-chaperone-like activity

来自植物病原体农杆菌的癌蛋白具有组蛋白伴侣样活性

• 发表时间: 2007
• 期刊: Plant Cell 19
• 作者: Terakura S.;Ueno Y.;Tagami H.;Kitakura S.;Machida C.;Wabiko H.;Aiba H.;Otten L.;Tsukagoshi H.;Nakamura K.;Machida Y.
• 通讯作者: Machida Y.