エンドサイトーシスにおけるF-BARドメインの役割

F-BAR 结构域在内吞作用中的作用

基本信息

批准号：
18050008
负责人：
伊藤俊樹
金额：
$ 4.03万
依托单位：
Kobe University (2007)The University of Tokyo (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050008/
关键词：
BARドメイン F-BARドメインエンドサイトーシス

项目摘要

1.前年度までに明らかにした、FBP17のF-BARドメイン内における点突然変異L7E、F11EおよびH17Dについて、COS7細胞内への過剰発現実験を行った。野生型のFBP17タンパク質の過剰発現では、細胞の陥入によるチューブ状膜構造の形成が誘起されたのに対し、いずれの変異体もこれらの膜変形活性を失っていた。これは前年度に明らかにしたin vitroでの膜変形アッセイの結果を支持するものであり、FBP17のF-BARドメイン内においてリン脂質結合と膜変形それぞれに関与するアミノ酸の存在を示唆するものである。2.前年度に確立したBARドメインとF-BARドメインの同一膜チューブ上への局在について、さらに多くのタンパク質を用いて検討を加えた。その結果、まずF-BARドメインを持つタンパク質については少なくとも(1)FBP17/CIP4サブファミリー(2)Syndapinサブファミリー、(3)PSTPIPサブファミリーの3つのグループが存在し、これらはCOS7細胞内での共発現によって誘導されるチューブ上において別個の局在を示すことが明らかとなった。さらにBARドメインタンパク質との詳細な局在比較から、意外なことにAmphiphysin (BAR)とPSTPIP(F-BAR)が高度に共局在することが明らかとなった。これらの結果は、同じF-BARドメインファミリー内においても、エンドサイトーシスのそれぞれのステップで異なる細胞膜の曲率を認識する、もしくは作り出すサブグループに分業化されることを示唆している。またF-BARファミリーとBARファミリーの間でも共通の膜曲率を認識するサブグループが在し、これらが特定の膜変形ステップにおいて協調的に作用すると考えられた。

1. 我们在COS7细胞中对去年发现的FBP17的F-BAR结构域中的点突变L7E、F11E和H17D进行了过表达实验。野生型 FBP17 蛋白的过度表达通过细胞内陷诱导管状膜结构的形成，而两种突变体都失去了这些膜变形活性。这支持了前一年揭示的体外膜变形测定的结果，并表明FBP17 be的F-BAR结构域中存在参与磷脂结合和膜变形的氨基酸。 2.我们研究了BAR结构域和F-BAR结构域在同一个膜管上的定位，该膜管是前一年建立的，使用了更多的蛋白质。结果，至少存在三组具有F-BAR结构域的蛋白质：（1）FBP17/CIP4亚家族、（2）Syndapin亚家族和（3）PSTPIP亚家族，并且这些被揭示出它们表现出不同的定位在共表达诱导的管上。此外，与 BAR 结构域蛋白的详细定位比较意外地揭示了 Amphiphyn (BAR) 和 PSTPIP (F-BAR) 高度共定位。这些结果表明，即使在相同的 F-BAR 结构域家族中，亚组在内吞作用的每个步骤中也会识别或产生不同的细胞膜曲率。此外，存在一个识别F-BAR家族和BAR家族之间共同的膜曲率的亚群，并且认为这些亚群在特定的膜变形步骤中协同作用。