腫瘍選択的血管内皮細胞障害物質フェニラヒスチンを戦略分子とする分子創薬基盤研究

使用苯尼拉司汀（一种肿瘤选择性血管内皮细胞毒性物质）作为战略分子的分子药物发现基础研究

基本信息

批准号：
18032081
负责人：
林良雄
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science (2007)Kyoto Pharmaceutical University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、がん組織に新生される血管内皮細胞を障害する新生血管内皮細胞障害剤(VDA)として機能する微小管脱重合化合物(チューブリン重合阻害物質)KPU-2を既に開発し、米国において臨床試験を進めている。この分子はジケトピペラジン骨格からなる小分子であるが、僅かな構造変換で活性が大きく変化することから、チューブリン分子に厳格に認識されていることが予想される。そこで、この化合物の結合部位、ならびにその脱重合機構解析のために、光標識可能なプローブ化誘導体の創製研究を進め、蛋白質を光修飾できるベンゾフェノン構造を有する高活性誘導体KPU-244を開発した。さらに光標識後のウエスタンブロティングによる検出のためにKPU-244にBiotin-Tagを付けたKPU-244-B1を設計・合成した。KPU-244-B1は若干生物活性が低下するものの、微小管を認識するのに十分な活性を維持していたことから、これを光親和性プローブとしてチューブリンの光親和性標識を実施したところ、照射時間依存的にチューブリンが標識された。αおよびβの両チューブリンユニットが標識されたことから、互いに結合する2つのユニットの境界領域にKPU-244-Blは結合すると考察された。一方、この標識はKPU-2、KPU-244、およびコルヒチン各々の共存により競合的に阻害されることから、光親和性プローブならびにKPU-2の結合は特的なものであることが示唆され、さらにコルヒチン結合部位の近傍で2つのチューブリンユニットの境界領域を認識しているものと考察される。詳細な結合部位の同定は現在進行中であり、最終的には結合部位を決定することで、脱重合機構の解明に迫りたいと考えている。

我们已经开发出KPU-2，一种微管解聚化合物（微管蛋白聚合抑制剂），其作为新生血管内皮细胞抑制剂（VDA），可损害癌组织中新生的血管内皮细胞，正在进行临床试验。尽管该分子是由二酮哌嗪骨架组成的小分子，但由于其活性随着轻微的结构变化而发生显着变化，因此预计它会被微管蛋白分子严格识别。因此，为了分析该化合物的结合位点及其解聚机制，我们进行了研究以创建可光标记的探针衍生物，并开发了KPU-244，这是一种具有二苯甲酮结构的高活性衍生物，可光修饰蛋白质。此外，我们设计并合成了KPU-244-B1，它是带有生物素标签的KPU-244，用于光标记后通过Western blotting进行检测。尽管KPU-244-B1的生物活性略有下降，但它仍保持足够的活性来识别微管，因此我们将其用作光亲和标记微管蛋白的光亲和探针，微管蛋白以照射时间依赖性方式被标记。由于α和β微管蛋白单元均被标记，因此认为KPU-244-Bl结合至彼此结合的两个单元的边界区域。另一方面，该标记因KPU-2、KPU-244和秋水仙碱的共存而被竞争性抑制，表明光亲和探针和KPU-2的结合是特异性的。此外，认为其识别边界。靠近秋水仙碱结合位点的两个微管蛋白单元之间的区域。目前正在进行详细结合位点的鉴定，通过最终确定结合位点，我们希望阐明解聚机制。