腫瘍選択的血管内皮細胞障害物質フェニラヒスチンを戦略分子とする分子創薬基盤研究

使用苯尼拉司汀（一种肿瘤选择性血管内皮细胞毒性物质）作为战略分子的分子药物发现基础研究

• 批准号: 18032081
• 负责人: 林 良雄
• 金额: $ 3.39万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science (2007)Kyoto Pharmaceutical University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18032081/
• 关键词: 合成化学; 分子認識; 癌; 生体分子; 薬学; フェニラヒスチン; 血管内皮細胞障害; ジケトピペラジン

我々は、がん組織に新生される血管内皮細胞を障害する新生血管内皮細胞障害剤(VDA)として機能する微小管脱重合化合物(チューブリン重合阻害物質)KPU-2を既に開発し、米国において臨床試験を進めている。この分子はジケトピペラジン骨格からなる小分子であるが、僅かな構造変換で活性が大きく変化することから、チューブリン分子に厳格に認識されていることが予想される。そこで、この化合物の結合部位、ならびにその脱重合機構解析のために、光標識可能なプローブ化誘導体の創製研究を進め、蛋白質を光修飾できるベンゾフェノン構造を有する高活性誘導体KPU-244を開発した。さらに光標識後のウエスタンブロティングによる検出のためにKPU-244にBiotin-Tagを付けたKPU-244-B1を設計・合成した。KPU-244-B1は若干生物活性が低下するものの、微小管を認識するのに十分な活性を維持していたことから、これを光親和性プローブとしてチューブリンの光親和性標識を実施したところ、照射時間依存的にチューブリンが標識された。αおよびβの両チューブリンユニットが標識されたことから、互いに結合する2つのユニットの境界領域にKPU-244-Blは結合すると考察された。一方、この標識はKPU-2、KPU-244、およびコルヒチン各々の共存により競合的に阻害されることから、光親和性プローブならびにKPU-2の結合は特的なものであることが示唆され、さらにコルヒチン結合部位の近傍で2つのチューブリンユニットの境界領域を認識しているものと考察される。詳細な結合部位の同定は現在進行中であり、最終的には結合部位を決定することで、脱重合機構の解明に迫りたいと考えている。

我们已经开发了一种微管解聚化合物（微管蛋白聚合抑制剂）KPU-2，该化合物充当新生血管内皮细胞破坏剂（VDA），损害了在癌症组织中损坏血管内皮细胞，并且正在美国正在接受临床试验。该分子是一个由二酮替嗪主链组成的小分子，但其活性随着略有的结构转化而大大变化，因此预计它会被微管蛋白分子严格识别。因此，为了分析该化合物的结合位点及其去聚合机制，我们已经对光照张探测的衍生物进行了研究，并开发了一种高度活性的衍生物KPU-244，该衍生物具有苄烯酮结构，该结构可以光明蛋白化。此外，设计并合成了带有生物素标签的KPU-244-B1，用于通过光标记后的蛋白质印迹检测。尽管KPU-244-B1的生物学活性略有降低，但仍然足以识别微管，并且当使用该光蛋白作为光性探针进行小管蛋白的光亲和度标记时，小管蛋白以时间依赖的方式标记。由于标记了α和β微管蛋白单元，因此认为KPU-244-BL结合了两个相互结合的两个单元的边界区域。另一方面，该标签受到KPU-2，KPU-244和秋水仙碱的共存的竞争性抑制，这表明光性探针和KPU-2的结合是特异性的，并且进一步认为它可以识别出在彩蛋白结合位点附近的两个小管蛋白的边界区域。目前正在进行详细的结合位点识别，我们希望最终确定结合位点以阐明解聚机制。

项目成果

微小管作用に基づくジケトピペラジン型Vascular Disrupting Agentの創製

基于微管作用的二酮哌嗪型血管破坏剂的研制

• 发表时间: 2007
• 作者: 林良雄;山崎有理
• 通讯作者: 山崎有理

Preparation of dehydrophenylahistins and analogs for treat-ing vasculaz proliferarion

治疗血管增生的脱氢苯阿西汀及其类似物的制备

• 发表时间: 2007

微小管を標的とする新規Vascular Disrupting Agentの作用機序研究-光標識プローブの開発とその利用-

以微管为靶点的新型血管破坏剂的作用机制研究 - 光学标记探针的开发及其用途 -

• 发表时间: 2007
• 作者: 林良雄;山崎有理;他7名
• 通讯作者: 他7名

New aspect of potent anti-microtubule agents phenylahistin and tubulin photoaffinity labeling

有效抗微管剂苯亚组蛋白和微管蛋白光亲和标记的新方面

• 发表时间: 2006
• 期刊: Peptide Science 2006
• 作者: M.Skwarczynski;Y.Hayashi;Y.Kiso他3名;Y.Hayashi他6名;Y.Hayashi他10名
• 通讯作者: Y.Hayashi他10名

Desinn and synthesis of oligoarginine-fluorescein conjugate possessing novel self-cleavable spacers as a model for effective intestinal absorption

具有新型自切割间隔基的寡精氨酸-荧光素缀合物的设计和合成作为有效肠道吸收的模型

• 发表时间: 2006
• 期刊: Peptide Science 2006
• 作者: M.Skwarczynski;Y.Hayashi;Y.Kiso他3名;Y.Hayashi他6名
• 通讯作者: Y.Hayashi他6名