ゲノム情報にもとづくM.Pneumoniaeの細胞構造の理解と病原性の解明

基于基因组信息了解肺炎支原体的细胞结构和致病性

基本信息

批准号：
18018044
负责人：
見理剛
金额：
$ 5.18万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までに作製したM.pneumoniae M129株の全ORFクローンコレクションを利用して,個々のORF産物の細胞内局在解析を続けた。以前から知られていた接着器官構成成分7種[MPN141(P1),MPN309(P65),MPN310(HMW2),MPN447(HMW1),MPN452(HMW3),MPN453(P30),MPN567(P200)]に加えて,これまで11種のORF産物[MPN001,MPN022,MPN065,MPN092,MPN117,MPN295,MPN311,MPN312,MPN321,MPN387,MPN688]が接着器官部分,または細胞の尾部に局在するのが観察されている。このうちMPN092,117,295,311,309,387,474,688は界面活性剤Triton X-100に不溶な画分に含まれるタンパク質で,細胞骨格の構成成分である可能性が高い。また,MPN022,065,321は代謝酵素のホモログ,MPN001,688はそれぞれDnaN,Sojタンパク質のホモログであった。これらの細胞内局在を電子顕微鏡によって高解像度に観察する試みも行った。電顕によるORF産物の局在観察を行うために,M.pneumoniae細胞を0.1%のTriton X-100でおだやかに処理し,細胞骨格構造(Rod部分)を露出させる条件検討を行った。また,電顕画像を平均化することによって,より解像度の高い像が取得できるようになった。電顕によるORF産物の局在観察は,免疫電顕法によって行った。本年度はMPN447(HMW1),452(HMW3),309(P65),312(P24)タンパク質にこの方法を適用し,これらのタンパク質がRod構造の先端からP65,HMW3,HMW1,P24の順で存在しているのを明確に観察した。

我们继续使用我们去年创建的肺炎支原体 M129 菌株的整个 ORF 克隆集合来分析单个 ORF 产物的亚细胞定位。除了此前已知的七种粘附器官组件【MPN141(P1)、MPN309(P65)、MPN310(HMW2)、MPN447(HMW1)、MPN452(HMW3)、MPN453(P30)、MPN567(P200)]为止观察到 11 种 ORF 产物 [MPN001、MPN022、MPN065、MPN092、MPN117、MPN295、MPN311、MPN312、MPN321、MPN387、MPN688] 位于粘附器官区域或细胞尾部。其中，MPN092、117、295、311、309、387、474和688是不溶于表面活性剂Triton X-100的级分中所含的蛋白质，并且可能是细胞骨架的构成成分。此外，MPN022、065和321是代谢酶的同源物，MPN001和688分别是DnaN和Soj蛋白的同源物。我们还尝试使用电子显微镜以高分辨率观察这些细胞内定位。为了通过电子显微镜观察ORF产物的定位，用0.1％Triton X-100温和处理肺炎支原体细胞，并检查暴露细胞骨架结构(棒部分)的条件。此外，通过对电子显微镜图像进行平均，可以获得更高分辨率的图像。使用免疫电子显微镜观察ORF产物的定位。今年，我们将这种方法应用于MPN447（HMW1）、452（HMW3）、309（P65）和312（P24）蛋白，发现这些蛋白以P65、HMW3、HMW1和P24的顺序存在。我清楚地观察到了杆结构的尖端。

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Centipede and inchworm models to explain Mycoplasma gliding

DOI：
10.1016/j.tim.2007.11.002
发表时间：
2008-01-01
期刊：
TRENDS IN MICROBIOLOGY
影响因子：
15.9
作者：
Miyata, Makoto
通讯作者：
Miyata, Makoto

電顕に期待するもの

从电子显微镜中可以看到什么

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
細胞工学
影响因子：
0
作者：
Miyata M;Ogaki H;宮田真人;宮田真人
通讯作者：
宮田真人

Genotyping analysis of Mycoplasma pneumoniae clinical strains in Japan between 1995 and 2005:Type shift phenomenon of M.pneumoniae clinical strains.Sequence analysis of gliding oritein Gli349 in Mycoplasma mobile

1995-2005年日本肺炎支原体临床株基因分型分析：肺炎支原体临床株型变现象。移动支原体中滑动蛋白Gli349的序列分析

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J.Med.Microbiol 11
影响因子：
0
作者：
Kenri;T.;Okazaki;N.;Yamazaki;T.;Narita;M.;Izumikawa;K.;Matsuoka;M.;Suzuki;S.;Horino;A. and Sasaki;T.
通讯作者：
T.

日本におけるマイコプラズマ肺炎の発生状況

日本支原体肺炎的发生现状