新規コロニーアッセイ法による腎臓前駆細胞の単離と誘導

使用新型集落测定方法分离和诱导肾祖细胞

基本信息

批准号：
17045027
负责人：
西中村隆一
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17045027/
关键词：
腎臓発生幹細胞 Sall1 Sall 腎臓形成前駆細胞ノックインマウス

项目摘要

Sallファミリーは種を越えて保存されたZincフィンガー蛋白である。我々はマウスSall1を発生期腎臓から単離し、この遺伝子が腎臓前駆細胞集団である後腎間葉に発現すること、このノックアウトマウスは腎臓を欠損することを見いだした。さらにSall1の遺伝子座にGFPを導入したマウスを作製し、腎臓前駆細胞集団である後腎間葉が光ることを確認し、さらにそこで発現する遺伝子群を同定している。本計画は、Sall1を使って、腎臓前駆細胞を同定する確実で信頼できる系を確立しようとするものである。まず後腎間葉を解離して、Wnt4を発現するフィーダー上で培養すると、一個の細胞からコロニーが形成され、糸球体や尿細管など多系統の分化マーカーを発現することを見いだした。次いでSall1-GFPノックインマウスの後腎間葉細胞からは、GFPを強発現する分画からのみコロニーが形成された。さらにこのGFPを発現する後腎間葉細胞を再凝集させ器官培養すると,3次元立体構造を再構築できた。またSall1ノックアウトマウスからのコロニーは、分化や数は正常だがサイズが減少していた。これらの結果から、Sall1を強発現する間葉細胞分画に腎臓前駆細胞が存在し、Sall1はその増殖に関与していることが示唆された。このアッセイ系をフィーダー細胞が不要なように改善することを試みたが、未だ成功していない。これはフィーダーからWnt4以外の因子が供給されているためと考えられる。今後このアッセイは腎臓前駆細胞が分化していく際の系譜決定の解析に役立つと考えられ、組織や切片のレベルでしか検討されていなかった腎臓形成が、単一細胞レベルで解析できるようになる可能性を秘めている。

Sall 家族是一组在物种间保守的锌指蛋白。我们从发育中的肾脏中分离出小鼠 Sall1，发现该基因在后肾间充质（肾脏祖细胞群）中表达，并且这种敲除小鼠缺乏肾脏。此外，他们还培育出了将 GFP 引入 Sall1 基因位点的小鼠，证实后肾间充质（肾脏祖细胞群）会发光，并进一步鉴定了其中表达的一组基因。该项目旨在建立一个可靠且可靠的系统，用于使用 Sall1 识别肾脏祖细胞。首先，当后肾间充质被解离并在表达 Wnt4 的饲养层上培养时，由单个细胞形成集落，并且发现它们表达多个谱系的分化标记物，包括肾小球和肾小管。然后，仅从强烈表达 GFP 的部分中，由 Sall1-GFP 敲入小鼠的后肾间充质细胞形成集落。此外，当表达GFP的后肾间充质细胞在器官中重新聚集和培养时，可以重建三维结构。 Sall1 敲除小鼠的集落具有正常的分化和数量，但尺寸减小。这些结果表明肾祖细胞存在于强烈表达Sall1的间充质细胞部分中，并且Sall1参与其增殖。我们曾尝试改进该检测系统，使其不需要饲养细胞，但尚未成功。这被认为是因为Wnt4以外的因子是由供料器供给的。将来，该测定将可用于分析肾祖细胞分化过程中的谱系决定，并且仅在组织或切片水平上研究的肾脏形成现在将能够在单细胞水平上进行分析。它有潜力。