チロシンキナーゼ阻害剤の感受性を予測するサロゲートマーカーの確立

建立替代标记来预测对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性

• 批准号: 17015021
• 负责人: 清井 仁
• 金额: $ 2.94万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17015021/
• 关键词: 遺伝子; シグナル伝達; 薬剤反応性; 白血病; 分子標的療法

本研究においでは、白血病に対するチロシンキナーゼ阻害剤の感受性を規定するサロゲートマーカーを同定し、かつ、臨床検体を用いて簡便・迅速に施行可能な検査系の確立を目的とした。中でも、我々が新規に開発したFLT3阻害剤を中心に検討を進めた。活性型FLT3変異を有するヒト白血病細胞株および臨床検体において、恒常的にSTAT5分子はリン酸化しており、このリン酸化状態は、抗リン酸化STAT5単クローン抗体によりウエスタンブロットのみならずフローサイトメーター(FCM)によっても定量化活性化可能であった。これら細胞株、臨床検体をFLT3阻害剤で1時間処理後、STAT5のリン酸化レベルの変化をFCMで定量化したところ、その減少率は細胞増殖抑制阻害作用と相関し、阻害剤の感受性を簡便・迅速に予測しうる事を明らかにした。更に、BCR/ABL陽性白血病細胞株やKITの活性化を示す細胞株においても、ABL阻害剤、KIT阻害剤で同様の検討を行うことにより、本検査系が有用であることを確認し、チロシンキナーゼ阻害剤の感受性を予測する上でSTAT5のリン酸化状態の変化は有力なサロゲートマーカーであることを明らかにした。しかし、臨床検体を用いた解析の中で、阻害剤単剤ではSTAT5リン酸化レベルの低下が不充分で増殖抑制効果も部分的であっても、他の異なるキナーゼ阻害プロフィールを有する阻害剤を添加することにより充分な増殖抑制効果を示す症例が存在する事を見出した。この結果は、白血病の治癒を得る上で、併用療法の必要性を強く示唆するものである。また、FLT3遺伝子変異の有無により白血病細胞におけるcKIT遺伝子や細胞の分化に関係するPU.1、C/EBPαの発現量を層別化してみると、多様な発現様式を示すと同時に一定度の傾向を示すことが明らかとなり、これらを組み合わせることにより、併用療法の選択における層別化の可能性を認識するに至り、更なる検討を加えている。

在这项研究中，目的是确定定义酪氨酸激酶抑制剂对白血病的敏感性的替代标记物，并建立一个可以使用临床标本轻松而快速执行的测试系统。其中，我们专注于新开发的FLT3抑制剂。在人类白血病细胞系和携带活性FLT3突变的临床标本中，STAT5分子是组成型磷酸化的，并且这种磷酸化状态不仅可以通过蛋白质印迹，还可以通过抗磷酸化的Stat 5单核抗体来量化。用FLT3抑制剂处理这些细胞系和临床标本1小时后，使用FCM对STAT5的磷酸化水平的变化进行了变化，并发现降低速率与细胞增殖抑制的抑制作用相关，从而易于易于且可以快速预测抑制剂的敏感性。 Furthermore, we confirmed that this test system is useful by conducting similar studies with ABL inhibitors and KIT inhibitors in BCR/ABL-positive leukemia cell lines and cell lines that exhibit activation of KIT, and revealed that changes in the phosphorylation state of STAT5 are a potent surrogate marker in predicting the sensitivity of tyrosine kinase inhibitors.但是，在使用临床标本的分析中，发现即使单独抑制剂的STAT5磷酸化水平不足并部分抑制了生长，在某些情况下，其他具有不同激酶抑制作用的抑制剂也会显示出足够的生长抑制作用。该结果强烈表明需要结合治疗以治愈白血病。此外，已证明与白血病细胞中细胞分化有关的PU.1和C/EBPα的表达水平已显示出各种表达模式，同时又显示了一定程度的趋势。通过将这些结合在一起，我们就可以认识到在选择组合疗法中分层的可能性，并正在进行进一步的研究。