細胞時計による生死決定とがん化の研究

通过细胞时钟研究生死决定和癌症发展

基本信息

批准号：
17014063
负责人：
岡村均
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014063/
关键词：
発癌剤アポトーシス副腎肝臓マウス

项目摘要

1)発癌の日内変動の実験DEN(diethylnitrosamine, N-Nitrosodiethylamine)は代謝活性化が必要である発癌剤であるが、飲水投与ではマウスでもラットでも肝に発がんさせることができる。一回投与による発がん実験では、DENでもマウスでは10日齢時(肝細胞の増殖が旺盛)または部分肝切除術後に投与する。肝切除後、体内時計の朝の時刻と夜の時刻に、DEN(5mg,10mg,20mg)を一回投与し、時間特異的な発癌率を検索する。現在、半年以上肝がんまたは腺腫ができるまで経過観察中。また、より半減期が短く(3時間)、direct carcinogen(代謝されなくてもそれ自体が発がん物質)で、DNAにメチル化をもたらす発癌剤であるN-methyl-N-nitrosourea(MNU)の1回投与でも、発癌作用を確認中である。2)アポトーシスのビジュアル化と時計による制御機構の解明アポトーシスイニシエーターカスパーゼであるカスパーゼ9を活性化するApaf-1のプロモーターを利用する。P53で誘導されるApaf-1はシトクロムCとATPをリガンドとする細胞内デスレセプターとも考えられる。このApaf-1プロモーターにルシフェラーゼをつけたトランスジェニックマウスを作成し、その発現を確認した。3)時計遺伝子改変マウスの副腎の細胞動態の観察副腎皮質細胞は、束状層浅層殻生まれ網状層深層で死ぬことを確認した。リポフスチンは老化の指標としてよく用いられるが、実際、12ヶ月以上のマウス副腎皮質網状層の細胞は大量のリポフスチンを含むものが多い。時計遺伝子改変マウスでは、この分布が崩れ、リポフスチンが増大していた。

1）致癌作用的昼夜变化实验 DEN（二乙基亚硝胺，N-亚硝基二乙胺）是一种需要代谢激活的致癌剂，但当摄入饮用水时，它会导致小鼠和大鼠肝癌。在使用单剂量的致癌实验中，DEN 被给予 10 日龄（此时肝细胞增殖活跃）或部分肝切除后的小鼠。肝切除后，在生物钟的早晚时间各注射一次 DEN（5 mg、10 mg、20 mg），并测定特定时间的致癌率。目前，患者已观察半年多，直至发展为肝癌或腺瘤。此外，它的半衰期较短（3小时），是直接致癌物（即使不代谢本身也是致癌物），并且是导致DNA甲基化的致癌物，目前即使在多次给药后也有致癌作用。 2) 细胞凋亡的可视化和基于时钟的控制机制的阐明我们利用 Apaf-1 启动子，它激活 caspase-9，一种细胞凋亡启动子 caspase。 P53诱导的Apaf-1也被认为是一种细胞内死亡受体，其配体是细胞色素C和ATP。我们创建了将荧光素酶连接到该 Apaf-1 启动子的转基因小鼠，并证实了其表达。 3）时钟基因修饰小鼠肾上腺细胞动态观察我们证实，肾上腺皮质细胞诞生于束状层浅层，死亡于网状层深层。脂褐素常被用作衰老的指标，但实际上，12个月以上的小鼠肾上腺皮质网状层细胞中往往含有大量脂褐素。在时钟基因修饰的小鼠中，这种分布被破坏，脂褐质增加。