生物時計における抑制複合体の解明

生物钟中抑制复合物的阐明

• 批准号: 09F09348
• 负责人: 岡村 均
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09348/
• 关键词: 生体リズム; 時計遺伝子; 質量分析; in situ hybridization

Tet-Off Flag-Per2 NIH3T3系を用いてPER2に結合する蛋白質を同定した。SDS上展開の後、MS解析を行って得られた物質Mのコンディショナルノックアウトマウスを用いて研究した。全身発現CREを用いると、妊娠中期までに脱落し、胎生致死であった。ニューロン特異的CREを用いた脳特異的コンディショナルノックアウトを作成することに成功し、行動を検定中である。さらに、この物質が核酸代謝に関与することに注目し、核酸と日内リズムに関してメタボローム検索を進め、肝臓の時計は、肝細胞からヌクレオチドを全身臓器にリズミックに供給していることを発見した。ヌクレオチドであるATPは細胞のエネルギー産生に極めて重要であるが、これらはADPの量によって決まる。時計は、ミトコンドリアにあるADPを作る酵素の働きを活動期である夜間にADPの産生量を上げ、時計がないとATPが減少する。次に、我々の体を構成する細胞は恒常的なものでなく、常時、細胞が死に、その代わりとなる細胞が生まれている。この再生時に、核の成分である遺伝情報を担うDNAの構成成分となるdATP、dGTP、dTTP、dCTPの生成は、時計遺伝子によってコントロールされ、時計が無いと減少する。さらに、時計遺伝子Bmallの発現を肝臓で押さえると、肝臓での尿酸量が通常の倍以上に上がる。これは、時計欠損によりプリンの合成が弱まり、分解が亢進することによる。今回明らかとなった核酸酵素の日内変動の研究により、抗がん剤の副作用の日内変動を引き起こす重要な制御因子として、時計遺伝子による制御が示唆された。

我们使用 Tet-Off Flag-Per2 NIH3T3 系统鉴定了一种与 PER2 结合的蛋白质。在SDS上显色后，使用条件敲除小鼠对获得的物质M进行MS分析。当使用系统表达的 CRE 时，它会在妊娠中期脱落，导致胚胎死亡。我们已经使用神经元特异性 CRE 成功创建了大脑特异性条件敲除，目前正在测试其行为。此外，注意到这种物质参与核酸代谢，他们进行了有关核酸和昼夜节律的代谢组学搜索，发现肝脏时钟有节奏地从肝细胞向全身器官供应核苷酸。核苷酸 ATP 对于细胞能量产生至关重要，这由 ADP 的量决定。当线粒体中的酶活跃时，生物钟会增加夜间产生的 ADP 量，而没有生物钟，ATP 就会减少。其次，构成我们身体的细胞不是永久性的；细胞不断死亡，新细胞不断诞生来取代它们。在再生过程中，dATP、dGTP、dTTP 和 dCTP（携带遗传信息的核 DNA 的组成部分）的产生受到时钟基因的控制，在没有时钟的情况下会减少。此外，当肝脏中时钟基因Bmall的表达受到抑制时，肝脏中的尿酸量会增加至正常水平的两倍以上。这是因为时钟缺陷导致嘌呤合成减弱，嘌呤降解加速。此次揭示的核酸酶昼夜波动研究表明，生物钟基因的调控是导致抗癌药物副作用昼夜波动的重要控制因素。

项目成果

Hypertension due to loss of clock

时钟丢失导致高血压

• 发表时间: 2010
• 期刊: Current hypertension Reports
• 影响因子: 5.6
• 作者: Okamura H;Doi M;Fustin JM;Yamaguchi Y
• 通讯作者: Yamaguchi Y

Okamura H. Aldosterone and Clock, San Diego (Convention Center), June 17-18, 2010

Okamura H. 醛固酮和时钟，圣地亚哥（会议中心），2010 年 6 月 17-18 日

• 发表时间: 2010
• 作者: 金井好克;竹島浩;森泰生;久保義弘(編著);Sato M; Okamura H;Doi M; Okamura H;Tanaka R; Okamura H;Mizoro Y;Okamura H;Okamura H;Nishinaga H;Fukatsu Y;Moriya T;Okamura H;Okamura H
• 通讯作者: Okamura H

Dysregulated, cell-specific ccg's lead to disease.In, Il Ciocco in Lucca (Barga), Italy, June 12 -17, 2011

失调的细胞特异性 ccg 导致疾病。 In, Il Ciocco in Lucca (Barga), Italy, June 12 -17, 2011

• 发表时间: 2011
• 作者: 金井好克;竹島浩;森泰生;久保義弘(編著);Sato M; Okamura H;Doi M; Okamura H;Tanaka R; Okamura H;Mizoro Y;Okamura H;Okamura H;Nishinaga H;Fukatsu Y;Moriya T;Okamura H
• 通讯作者: Okamura H

Accurate determination of S-phase fraction in proliierative cells by dual fluorescence and peroxidase immunohistochemistry with 5-bromo-2'-deoxyuridine

使用 5-溴-2-脱氧尿苷双荧光和过氧化物酶免疫组织化学法准确测定增殖细胞中的 S 期分数

• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Histochemistry Cytochemistry
• 作者: 金井好克;竹島浩;森泰生;久保義弘(編著);Sato M; Okamura H;Doi M; Okamura H;Tanaka R; Okamura H
• 通讯作者: Tanaka R; Okamura H

Transportin 1 in the mouse brain : appearance in regions of neurogenesis, cerebrospinal fluid production/sensing, and circadian clock., 519 : 1770-1780, 2011

小鼠大脑中的转运蛋白 1：在神经发生、脑脊液产生/传感和生物钟区域中的出现。, 519 : 1770-1780, 2011

• DOI: 10.1002/cne.22600
• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Comparative Neurology
• 影响因子: 2.5
• 作者: Oyama S;Fujino H;Yamazaki R;Okura I;Regan JW;Awata A;Arai T;Murayama T.;Sato M; Okamura H
• 通讯作者: Sato M; Okamura H