ペプチド核酸型蛍光プローブを用いた生体中遺伝子発現の定量化に関する研究

利用肽核酸荧光探针定量体内基因表达的研究

基本信息

批准号：
16011254
负责人：
池田壽文
金额：
$ 4.61万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16011254/
关键词：
可視化ナノバイオ核酸細胞・組織発現制御

项目摘要

本研究者は、新規に開発した細胞膜透過性蛍光PNAプローブを用いた生細胞中に発現しているmRNAの逐次定量法の開発を平成15年度に引き続き目指した。(1)特定遺伝子に対応した細胞膜透過性蛍光PNAプローブの合成に成功した。細胞膜透過性蛍光PNAプローブの設計に必要な各種ビルディングブロックとその製法及び細胞膜透過性蛍光PNAプローブの細胞導入等分子生物学的応用に関する特許出願のうち、昨年12月にUS特許を取得できた。現在、生態系で代謝されにくい蛍光プローブの開発が急ピッチで進む中、US特許取得により、我々の研究成果が独自性の高いものであることを確認できた。(2)細胞膜透過性蛍光PNAプローブの生細胞への導入実験を行った。モデル系.として、既に実験系を確立している神経細胞を用いた。その結果、本PNAプローブが前処理や後処理を必要としないことに加え、a)標的を捕捉出来なかった過剰なプローブは細胞外に排出可能であること、b)細胞内局在化が可能であること、を証明した。細胞外排出できるということと酵素分解に耐えうるということを考え合わせると、今回新規に開発した細胞膜透過性蛍光PNAプローブは、FISHのみならずWISHに対応可能であることを証明できたことになり、今後1分子イメージング技術等の開発などへ幅広く展開できることを示唆した内容となった。以上、複数の細胞膜透過性蛍光PNAプローブによる同時検出に関する技術開発を行い、生細胞中の複数同時遺伝子発現量の定量化を確立し、当初予定していた研究目的は達成できた。

自 2003 年起，该研究人员旨在开发一种使用新开发的细胞膜渗透性荧光 PNA 探针连续定量活细胞中表达的 mRNA 的方法。 (1)我们成功合成了对应特定基因的可穿透细胞膜的荧光PNA探针。去年12月，我们申请了与设计细胞膜渗透性荧光PNA探针所需的各种构件、其制造方法以及分子生物学应用（例如细胞膜的细胞导入）相关的专利，并于去年12月获得了美国专利。可渗透的荧光 PNA 探针进入细胞。目前，在生态系统中难以代谢的荧光探针的开发正在快速进展，通过获得美国专利，我们能够确认我们的研究成果具有高度原创性。 (2)进行了将细胞膜透过性荧光PNA探针导入活细胞的实验。作为模型系统，我们使用已经建立了实验系统的神经元。因此，除了该 PNA 探针不需要预处理或后处理之外，a) 无法捕获靶标的过量探针可以从细胞中排出，b) 可以在细胞内定位。事实证明。考虑到它可以排泄到细胞外并且可以承受酶降解，我们已经能够证明新开发的细胞膜渗透性荧光PNA探针不仅可以用于FISH，还可以用于WISH。内容表明，未来可以广泛扩展到单分子成像技术的发展。如上所述，我们开发了使用多个细胞膜渗透性荧光PNA探针同时检测的技术，建立了活细胞中多个同时基因表达水平的定量，并实现了最初计划的研究目标。