ペプチド核酸型蛍光プローブを用いた生体中遺伝子発現の定量化に関する研究

利用肽核酸荧光探针定量体内基因表达的研究

基本信息

批准号：
16011254
负责人：
池田壽文
金额：
$ 4.61万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16011254/
关键词：
可視化ナノバイオ核酸細胞・組織発現制御

项目摘要

本研究者は、新規に開発した細胞膜透過性蛍光PNAプローブを用いた生細胞中に発現しているmRNAの逐次定量法の開発を平成15年度に引き続き目指した。(1)特定遺伝子に対応した細胞膜透過性蛍光PNAプローブの合成に成功した。細胞膜透過性蛍光PNAプローブの設計に必要な各種ビルディングブロックとその製法及び細胞膜透過性蛍光PNAプローブの細胞導入等分子生物学的応用に関する特許出願のうち、昨年12月にUS特許を取得できた。現在、生態系で代謝されにくい蛍光プローブの開発が急ピッチで進む中、US特許取得により、我々の研究成果が独自性の高いものであることを確認できた。(2)細胞膜透過性蛍光PNAプローブの生細胞への導入実験を行った。モデル系.として、既に実験系を確立している神経細胞を用いた。その結果、本PNAプローブが前処理や後処理を必要としないことに加え、a)標的を捕捉出来なかった過剰なプローブは細胞外に排出可能であること、b)細胞内局在化が可能であること、を証明した。細胞外排出できるということと酵素分解に耐えうるということを考え合わせると、今回新規に開発した細胞膜透過性蛍光PNAプローブは、FISHのみならずWISHに対応可能であることを証明できたことになり、今後1分子イメージング技術等の開発などへ幅広く展開できることを示唆した内容となった。以上、複数の細胞膜透過性蛍光PNAプローブによる同時検出に関する技術開発を行い、生細胞中の複数同時遺伝子発現量の定量化を確立し、当初予定していた研究目的は達成できた。

该研究人员在2003年继续使用新开发的细胞膜透明荧光PNA探针开发一种在活细胞中表达的mRNA的顺序定量方法。（1）我们已经成功合成了与特定基因相对应的细胞膜可渗透荧光PNA探针。在设计细胞膜可渗透荧光PNA探针的各种构件的专利申请中，其制造方法以及分子生物学应用，例如细胞引入细胞膜可渗透的荧光PNA探针，美国于去年12月获得了美国专利。目前，随着在生态系统中难以代谢的荧光探针的发展正在迅速发展，美国专利证实了我们的研究结果非常独特。（2）进行了实验，以将细胞膜可渗透的荧光PNA探针引入活细胞。我们使用已经建立实验系统作为模型系统的神经元。结果，我们证明，除了不需要预处理或处理后，a）未捕获目标的过多探针可以从细胞中驱逐出来，b）b）可能可以从细胞中定位。考虑到它可以从细胞中排出并且可以承受酶降解，因此新开发的细胞膜可渗透的荧光PNA探针证明，它不仅可以与鱼类，而且还可以与愿望兼容，这表明它可以在将来在将来的单物分子成像技术中广泛部署。上述技术已开发出使用多个细胞膜渗透荧光PNA探针同时检测，从而确定活细胞中多个同时基因表达的量的量化，从而实现了最初计划的研究目标。