二重分子識別原理に基づく新しい高精度DNA/RNA検出法

基于双分子识别原理的新型高精度DNA/RNA检测方法

基本信息

批准号：
16011219
负责人：
関根光雄
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,マイナーグルーブバインダー(MGB)分子を用いた二重分子識別原理に基づく遺伝子診断法の開発を目指した。MGB分子はDNA2重らせんの小溝中に2本の鎖で結合する。標的とする被検者のサンプルのDNAやmRNA断片にまずチップ上の人工DNAが結合し、その結果形成されたDNA2重らせんの小溝と接触する部位がグアニン塩基の場合にはピロール、それ以外の場合にはイミダゾールになるように分子設計した。このDervan則によって塩基配列を正確に分子認識できる。この設計に基づき、フェロセンのシクロペンタジエニル環にカルボキシル基を経て4種類の3量体からなるポリアミドを連結したマイナーグルーブについて数種類合成しすでに合成に成功した分子とともに電気化学的酸化還元反応のCV応答を測定した。その結果,期待された応答が得られたが,金電極で測定する際に,再現性に問題があることが気がついた。今後は,再現性が確かになる電気化学応答の実験系を構築する必要があると思われる。上述した方法で合成したフェロセン標識したMGBの中で、最も優れたCVデータを示した分子を実際に活用して、その塩基識別能について詳細に検討した。この実験では,G-TやG-Aミスマッチが深刻な塩基配列をとくに選びその測定精度の正確さについて調べた。また、必要なときには、チップ側のDNA断片に2-チオウラシル基を導入して精度をさらに向上することも検討した。一方,MGB分子の長さがどれくらいが適当であるか,調べた結果,3量体でヘアピン型にすることが重要である知見が得られた。

这项研究旨在基于使用次要凹槽粘合剂（MGB）分子的双分子鉴定原理开发遗传诊断方法。 MGB分子由两条链结合到双DNA螺旋的小凹槽中。分子设计是使芯片上的人造DNA首先结合到靶向受试者样品的DNA或mRNA片段，并且当该位点接触所得的DNA双螺旋的小凹槽时，它是鸟嘌呤碱基，它变成了吡咯，在其他情况下也是咪唑。该dervan规则允许对碱序列进行准确的分子识别。基于此设计，合成了几个小凹槽，其中四个三晶聚酰胺通过羧基和四种类型的聚酰胺与二循环的环戊二烯基环相连，并且由已经成功实用的分子与已经成功的分子一起测量了由四种类型的聚酰胺。结果显示了预期的响应，但注意到用金电极测量可重复性存在问题。看来有必要为电化学响应构建实验系统，以确保可重复性。在使用上述方法合成的二兴标记的MGB中，显示最佳CV数据的分子实际上用于确定其基础歧视能力。在此实验中，我们专门选择了具有严重G-T和G-A不匹配的基本序列，并研究了其测量精度的准确性。此外，在必要时，还认为，通过将2-硫核酸组引入芯片侧的DNA片段来进一步提高准确性。另一方面，我们研究了MGB分子合适多长时间，并发现将其变成带有三聚体的发夹形状很重要。