銅トランスポータATP7A・ATP7Bによる抗癌剤耐性の分子機構の解析

铜转运蛋白ATP7A和ATP7B抗癌耐药的分子机制分析

基本信息

批准号：
14030072
负责人：
古川龍彦
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030072/
关键词：
銅トランスポータ抗癌剤耐性シスプラチン PタイプATPase

项目摘要

複数のATP7A発現細胞を用いて、種々の抗癌剤に対する耐性度をMTTアッセイで調べた。アドリアマイシン(ADM)、Mitxantrone、CPT-11、VP-16、Paclitaxel、CDDP、SN-38に対してそれぞれ10、5.5、3.5、10、2.5、100倍の耐性を示すことが確認できた。抗癌剤ADMに対してATP7A発現細胞は約10倍耐性となる。その蛍光を利用して、ADMのATP7A発現細胞での細胞内の局在を調べた。その結果、親株細胞やATP7B発現細胞では核に強い蛍光が観察されたが、ATP7A発現細胞ではADMの蛍光が全体に弱く、蛍光も核周辺に局在していることが確認された。さらに、RI標識ADMを用いてその細胞外への排出を調べたATP7A発現細胞でADMの排出が亢進して蓄積が減少していた。ヒンジドメインの1270番目のアスパラギンをセリンに置換した変異型ATP7B(激症型ウイルソン病の患者に見られる)の発現細胞と6つある銅結合部位の5種類の欠失変異ATP7B発現細胞を単離して、CDDPに対する耐性を調べた。銅の輸送に重要であると考えられるヒンジドメインの変異体や6番目の銅結合部位の欠失変異体ではCDDPに対して感受性を示し、ATP7Bの輸送機能がCDDP耐性に関わっている可能性をしめした。また、野生型のATP7B発現細胞について様々な発現量を示す10個以上におよぶATP7B発現細胞株と単離してCDDP耐性を検討した。その結果ATP7Bの発現量が非常に高い場株ではCDDPにむしろ感受性になる結果を得た。ATP7AとATP7B発現細胞の耐性克服薬剤のスクリーニングを行っているが、現在までのところ、有望な薬剤は見いだしていない。

使用多个表达 ATP7A 的细胞，通过 MTT 测定研究对各种抗癌药物的耐药性。已证实对阿霉素（ADM）、米特蒽醌、CPT-11、VP-16、紫杉醇、CDDP和SN-38的耐药性分别是10、5.5、3.5、10、2.5和100倍。表达 ATP7A 的细胞对抗癌药物 ADM 的抵抗力大约高出 10 倍。利用这种荧光，我们研究了 ADM 在表达 ATP7A 的细胞中的细胞内定位。结果，在亲代细胞系和表达ATP7B的细胞中在细胞核中观察到强荧光，但证实在表达ATP7A的细胞中，ADM荧光整体较弱并且荧光定位于细胞核周围。此外，在检测RI标记的ADM的细胞外排泄的ATP7A表达细胞中，ADM排泄增强并且积累减少。我们分离了表达突变体 ATP7B 的细胞，其中铰链结构域中第 1270 位的天冬酰胺被丝氨酸取代（在患有严重威尔逊病的患者中可见），以及在六个铜结合位点表达五种类型的缺失突变体 ATP7B 的细胞对 CDDP 的抗性。被调查。铰链结构域中的突变体被认为对铜转运很重要，而缺乏第六个铜结合位点的突变体对 CDDP 敏感，这表明 ATP7B 的转运功能与 CDDP 抗性有关。此外，从野生型ATP7B表达细胞中分离出超过10种表现出不同表达水平的ATP7B表达细胞系，并检查了CDDP抗性。结果，我们发现ATP7B表达水平极高的野外菌株对CDDP相当敏感。我们目前正在筛选药物来克服表达ATP7A和ATP7B的细胞的耐药性，但到目前为止我们还没有找到任何有希望的药物。