チミジンホスホリラーゼ阻害剤による腫瘍増殖抑制とその基礎的研究

胸苷磷酸化酶抑制剂抑制肿瘤生长及其基础研究

基本信息

批准号：
09255249
负责人：
古川龍彦
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)新しいチミジンホスホリラーゼ(TP)阻害剤をスクリーニングし、既存の阻害剤の数百倍強力な阻害剤TPIを開発した。TPIは水溶性で経口投与が可能な毒性の低い物質で臨床薬剤として十分に使用可能な性質を持っていた。2)ヒト癌細胞由来のTP強制発現細胞株と発現していない株をヌードマウスに移植して、TP阻害剤を1日二回経口的に投与した。TP発現癌細胞の阻害剤投与群では非投与群に比べて投与開始後10日目では腫瘍重量を50%に抑制する事が可能であった。これらの腫瘍を三週間後に摘出してTPの発現、毛細血管数、アポトーシスについて比較した。TP発現株では毛細血管数が有意に増加し、アポトーシス細胞は少なかった。培養条件下ではTPを発現していない癌細胞でも、移植条件ではTPが低レベルで発現していることが分かった。3)無酸素条件下の培養でTP強制発現細胞は親株に比べ増殖が速かった。無酸素条件で48時間培養後にこれらの細胞のDNAをFACSで解析すると、TP非発現細胞では断片化されたDNAが15%あるが、TP発現細胞では3.8%と減少し、TP発現細胞が低酸素下でのアポトーシスに対して抵抗性を示している事が明らかとなった。4)WiDr細胞でのTNFによるTPの転写活性化の機構をルシフェラーゼアッセイで解析した。5'末転写開始点から上流140ベースの中にシス転写制御エレメントがあるものと考えられた。5)2種類の癌細胞株由来のTP発現細胞ではフルオロデオキシウリジンにたいする感受性が親株に比べ30-40倍上昇しており,TPIの存在下には感受性は親株と同程度まで低下した。フルオロデオキシウリジンの代謝系を調べたところ、RNAへの取り込みが増加して、感受性が増強していた。6)TPのターゲティング用のプラスミドをES細胞に導入し、サザンブロットでヘテロザイゴ-トの欠失を確認した。

1）我们筛选了一种新的胸苷磷酸化酶（TP）抑制剂，并开发了一种抑制剂TPI，其效力比现有抑制剂强数百倍。 TPI是一种水溶性、口服、低毒物质，具有足够的特性可用作临床药物。 2)将人癌细胞来源的TP表达细胞系和非TP表达细胞系移植到裸鼠体内，每天两次口服TP抑制剂。在用表达TP的癌细胞抑制剂治疗的组中，与未治疗组相比，在治疗开始后第10天，肿瘤重量可以抑制50％。三周后切除这些肿瘤，并比较 TP 表达、毛细血管数量和细胞凋亡。在TP表达系中，毛细血管数量显着增加，凋亡细胞减少。即使是在培养条件下不表达 TP 的癌细胞，也被发现在移植条件下也能表达低水平的 TP。 3）当在缺氧条件下培养时，被迫表达TP的细胞比亲本菌株生长得更快。在缺氧条件下培养48小时后，当通过FACS分析这些细胞的DNA时，在非TP表达细胞中，15%的DNA被片段化，但在TP表达细胞中，这一比例下降至3.8%，这表明TP 表达细胞水平较低，很明显这些细胞在氧气下能抵抗细胞凋亡。 4)利用荧光素酶分析分析WiDr细胞中TNF对TP转录激活的机制。据认为，在5'端转录起始位点上游140个碱基范围内存在顺式转录控制元件。 5)在两类癌细胞系衍生的表达TP的细胞中，与亲本系相比，对氟脱氧尿苷的敏感性增加了30-40倍，并且在TPI存在的情况下，敏感性降低至与亲本系相同的水平。父线。当我们研究氟脱氧尿苷的代谢系统时，我们发现它与 RNA 的结合增加，从而导致敏感性增强。 6)将TP靶向质粒导入ES细胞，并通过Southern印迹证实杂合子的缺失。