チミジンホスホリラーゼ阻害剤による腫瘍増殖抑制とその基礎的研究

胸苷磷酸化酶抑制剂抑制肿瘤生长及其基础研究

基本信息

批准号：
09255249
负责人：
古川龍彦
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)新しいチミジンホスホリラーゼ(TP)阻害剤をスクリーニングし、既存の阻害剤の数百倍強力な阻害剤TPIを開発した。TPIは水溶性で経口投与が可能な毒性の低い物質で臨床薬剤として十分に使用可能な性質を持っていた。2)ヒト癌細胞由来のTP強制発現細胞株と発現していない株をヌードマウスに移植して、TP阻害剤を1日二回経口的に投与した。TP発現癌細胞の阻害剤投与群では非投与群に比べて投与開始後10日目では腫瘍重量を50%に抑制する事が可能であった。これらの腫瘍を三週間後に摘出してTPの発現、毛細血管数、アポトーシスについて比較した。TP発現株では毛細血管数が有意に増加し、アポトーシス細胞は少なかった。培養条件下ではTPを発現していない癌細胞でも、移植条件ではTPが低レベルで発現していることが分かった。3)無酸素条件下の培養でTP強制発現細胞は親株に比べ増殖が速かった。無酸素条件で48時間培養後にこれらの細胞のDNAをFACSで解析すると、TP非発現細胞では断片化されたDNAが15%あるが、TP発現細胞では3.8%と減少し、TP発現細胞が低酸素下でのアポトーシスに対して抵抗性を示している事が明らかとなった。4)WiDr細胞でのTNFによるTPの転写活性化の機構をルシフェラーゼアッセイで解析した。5'末転写開始点から上流140ベースの中にシス転写制御エレメントがあるものと考えられた。5)2種類の癌細胞株由来のTP発現細胞ではフルオロデオキシウリジンにたいする感受性が親株に比べ30-40倍上昇しており,TPIの存在下には感受性は親株と同程度まで低下した。フルオロデオキシウリジンの代謝系を調べたところ、RNAへの取り込みが増加して、感受性が増強していた。6)TPのターゲティング用のプラスミドをES細胞に導入し、サザンブロットでヘテロザイゴ-トの欠失を確認した。

1）筛选新的胸苷磷酸化酶（TP）抑制剂以开发TPI，这比现有抑制剂强几百倍。 TPI是一种可以口服给药的水溶性，低毒物质，具有可用作临床药物的特性。 2）将源自人类癌细胞和非表达菌株的强制表达细胞系植入裸小鼠中，每天口服两次TP抑制剂。在表达TP癌细胞的组中，与非管理治疗的组相比，在给药后的第10天，肿瘤的重量可以抑制至50％。三周后去除这些肿瘤，以比较TP表达，毛细血管计数和凋亡。在表达TP的菌株中的毛细血管数量显着增加，凋亡细胞较少。发现即使在培养条件下不表达TP的癌细胞在移植条件下也以低水平表达。 3）在缺氧条件下培养中，TP肌的细胞比母体菌株快地增殖。在缺氧条件下进行了48小时的培养后，通过FACS分析了这些细胞的DNA，尽管在表达TP-Non的细胞中发现了15％的碎片DNA，但在表达TP的细胞中，它降低至3.8％，表明TP表达细胞在低氧下对凋亡具有抵抗力。 4）通过荧光素酶测定法分析了TNF诱导的Widr细胞中TP转录激活的机制。人们认为，从5'转录起始点上游的140个碱基中有一个顺式转录控制元件。 5）与母体菌株相比，在表达两种类型的癌细胞系的TP表达细胞中对氟脱氧尿苷的敏感性增加了30-40倍，在存在TPI的情况下，敏感性降低至与母菌株的敏感性相同。当检查氟脱氧尿苷时，发现其对RNA的摄取增加，灵敏度提高。 6）将靶向TP的质粒引入ES细胞中，并通过Southern印迹确认了杂合子缺失。