各種変異p53遺伝子導入細胞のマイクロプレートによる放射線・制癌剤感受性の測定

使用引入各种突变 p53 基因的细胞微孔板测量辐射和抗癌药物敏感性

• 批准号: 14030068
• 负责人: 岡市 協生
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030068/
• 关键词: p53; 癌治療; スクリーニング; 放射線耐性; 放射線感受性; 制癌剤; アポトーシス; 遺伝子導入

1、4種類の変異p53遺伝子を導入した細胞の放射線感受性を測定したところ、放射線感受性がp53の変異部位によって異った。放射線感受性と相関している項目は、yeast functional assayの判定とアポトーシスの誘導であった。また、いくつかの制癌剤に対する感受性を調べたところ、制癌剤によって変異p53遺伝子導入細胞の感受性が異なった。2、これらの実験結果をもとにして、データベースによる各種癌細胞におけるp53の変異部位を検索して、p53タンパク質アミノ酸配列全領域での変異部位、変異頻度、どのアミノ酸へ変異したかを調べて、作成すべき変異p53遺伝子のデザインを行った。3、デザインした変異p53遺伝子を人工的に作成した。最終的には、癌細胞でよく見つかっている変異p53を70種類、リン酸化やアセチル化が起こる部位の変異を27種類作成した。4、これら約100種類の変異p53遺伝子DNAを精製した。5、精製した変異p53遺伝子DNAを細胞に導入した。リン酸化やアセチル化が起こる部位の変異p53遺伝子は、ほぼ全ての遺伝子導入が完了した。また、癌細胞でよく見つかっている変異p53は、約半数で細胞への遺伝子導入が行われた。

1。当测量用四个突变体p53基因转染的细胞的放射敏性时，辐射灵敏度不同，取决于p53突变的位点。与辐射敏感性相关的项目是酵母功能测定和凋亡的诱导。此外，当我们研究对几种抗癌药物的敏感性时，突变p53转基因细胞的敏感性因抗癌药物而异。 2。基于这些实验结果，我们使用数据库搜索了在各种癌细胞中p53的突变位点，检查了突变位点，突变频率以及在p53蛋白氨基酸序列的所有区域突变的氨基酸，并设计了突变的P53基因。 3。我们设计的突变体p53基因是人为创建的。最终，在癌细胞中通常发现了70种类型的突变体p53，并在发生磷酸化和乙酰化的部位上发现了27种类型的突变。 4。纯化了大约100种突变的P53基因DNA。 5。将纯化的突变体p53基因DNA引入细胞中。突变的p53基因的几乎所有基因转移都已经完成了磷酸化和乙酰化的位点。此外，将大约一半的突变体p53（通常在癌细胞中发现）转移到细胞中。

项目成果

岡市協生: "p53はどこからきたのか"放射線生物研究. 37. 43-52 (2002)

Kyosei Okaichi：“p53 从哪里来？” 37. 43-52 (2002)

森田直子: "放射線照射による細胞遊走とp53の関わり"長崎医学会雑誌. 77. 332-334 (2002)

Naoko Morita：“p53 与放射线照射诱导的细胞迁移的关系”长崎医学会杂志 77. 332-334 (2002)。

岡市協生: "低線量放射線によるp53シグナルの環境ストレスによる修飾"広島医学. 55. 278-279 (2002)

Kyosei Okaichi：“低剂量辐射引起的环境应激对 p53 信号的修改”广岛医学 55. 278-279 (2002)。

Okaichi, K: "Hypergravity modified the signal transduction of ionizing radiation through p53"J.Radiat.Res.. (in press).

Okaichi, K：“超重力通过 p53 改变了电离辐射的信号转导”J.Radiat.Res..（正在出版）。

Okaichi, K: "Low dose of wortmannin reduces radiosensitivity of human glioblastoma cells through the p53 pathway"Oncol.Rep.. 9. 859-862 (2002)

Okaichi, K：“低剂量的渥曼青霉素通过 p53 途径降低人胶质母细胞瘤细胞的放射敏感性”Oncol.Rep.. 9. 859-862 (2002)