臨床用遺伝子導入ベクター開発を目的としたコモンマーモセット前臨床動物系の確立

建立普通狨猴临床前动物系统以开发临床基因转移载体

基本信息

批准号：
12217027
负责人：
谷憲三朗
金额：
$ 54.14万
依托单位：
Kyushu University (2002-2004)The University of Tokyo (2000-2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1)GM-CSF免疫遺伝子治療(GVAX)を受けた患者血清を用いたSEREX法による腎癌腫瘍抗原の同定:GVAX接種後臨床経過が良好な患者培養腎癌細胞と腎癌細胞株よりcDNA発現λファージライブラリーを構築し、同症例の治療後血清を用いたSEREX法で計28陽性プラークを得た。塩基配列決定の結果、13種類の既知遺伝子のC末端側部分配列が抗原としてクローン化されたことがわかった(内訳はtNASPが9、EKI1が5、PHFが3、vezatin、E2bが2個、その他各1個)。癌細胞cDNAアレイ解析結果ではtNASP遺伝子で、甲状腺を除くほぼ全ての臓器で癌組織での発現が多い傾向が見られ、卵巣、子宮、頸部、精巣、小腸の5つの臓器で癌組織において有意な差が認められた。しかし、その他のSEREX抗原に関しては特にどちらか一方に片寄っている傾向はなかった。またこれらのSEREX抗原はRT-PCR法によりほぼ全ての正常臓器に発現を認めた。一方患者抗体パネルを用いたウェスタンブロット解析結果から、GVAXを受け、最も臨床的効果を認めた患者の治療後血清で抗tNASPならびにTMF抗体価が有意に上昇しており、特に後者は癌患者全般の血清中でも増加を認めるという大変興味深い結果を得た。今後さらに検体数を増して確認をして行くことが必要であるが、今後の癌診断・治療研究への応用が期待される。2)白血病モデルコモンマーモセット(CM)の作出:難治性の急性リンパ性白血病霊長類モデル作出を目的にp190タイプbcr/ablcDNA発現HIVベクターを作製し、CM自家末梢血幹細胞への遺伝子導入を行い、2頭のCMに自家移植し現在経過観察中である。同様にあと3頭への移植も行う予定である。白血病化の有無の観察およびLAM-CR法などでの経過観察を行う予定である。さらに成人T細胞性白血病モデル作出の準備も行っている。

1）使用血清鉴定出接受GM-CSF免疫基因治疗（GVAX）的患者：通过培养的肾脏癌细胞和肾脏癌细胞系构建了表达cDNA的λ噬菌体库的患者：使用Serex praine serex构建了良好的临床进度，并使用serex serex构建了良好的临床进展。测序结果表明，将13个已知基因的C末端子序列克隆为抗原（TNASP的分解为9，Eki1的分解为5，PHF为5，对于Vezatin，E2B，E2B，1个，另一个为1）。癌细胞cDNA阵列分析的结果表明，除甲状腺以外的几乎所有器官中，在癌症组织中的表达趋势更高，并且在五个器官中观察到癌症组织的显着差异：卵巢，子宫，宫颈，测试，遗传和小纯料。但是，没有其他Serex抗原具有一侧的趋势。此外，这些Serex抗原几乎通过RT-PCR在所有正常器官中表达。另一方面，使用患者抗体面板进行蛋白质印迹分析表明，在接受GVAX且具有最大临床作用的患者治疗后，血清中的抗TNASP和TMF抗体滴度显着增加，而后者尤其显示所有癌症患者的血清均增加。有必要增加未来的标本数量以确认，但预计将应用于未来的癌症诊断和治疗研究。 2）创建白血病模型常见的果棒（CM）：准备P190型BCR/ABLCDNA HIV载体，以创建一种耐火性急性淋巴细胞性白血病模型的模型，基因被转移到自动化学中，自动化为the Transpland and plassplant and Transplant and Transplant and compss，基因被转移到自动血液干细胞中。同样，我们计划对三匹马进行移植。我们计划观察是否发生了白血病，并使用LAM-CR方法进行了随访。此外，正在制定准备成人T细胞白血病的模型。