cameleon1分子イメージングによる局所的カルシウム動態の解析

使用cameleon1分子成像分析局部钙动态

基本信息

批准号：
11242208
负责人：
宮脇敦史
金额：
$ 55.23万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

当研究チームは2002年に、ヒユサンゴからクローニングした蛍光蛋白質カエデの、紫(外)光によって色が緑から赤に変換する特性を利用して、光で細胞をマーキングする技術を開発した。神経回路における神経細胞一個一個の全体像を浮かび上がらせたり、発生における細胞の系譜を追跡することに応用できることを証明した。さらに、緑と赤の状態のカエデたんぱく質の構造解析の結果、カエデたんぱく質の発色団が、その近傍のペプチド鎖切断に伴う構造変化によって緑色から赤色に変化するように広がることを解明した。そのペプチド鎖切断は、紫(外)光を吸収したカエデたんぱく質が触媒活性を発揮することによって実現するものと結論され、たんぱく質内で起こる光化学の新しい様相を発見することとなった。・カエデ技術など光で操作する技術を、顕微鏡に盛り込む試みを行った。Digital Micromirror Device(PLUS社のプロジェクターから取り出した)を通常の顕微鏡の視野絞りに設置することによって、自由な証明パターンを可能にする光学システムを開発した。さらに縞投影法を組み合わせることによって、蛍光シグナルの断層像が容易に取得できる顕微鏡を作製した。・神経細胞のシナプス形成がグリア細胞の存在によって促進されることは以前から知られている。「この効果がグリア細胞の接着因子あるいは液性因子、どちらによってもたらされるのか?」が問題にされてきた。これまで未開拓だった接着効果をはじめて体系的に証明した。神経細胞の局所に、インテグリンを介してグリア細胞が接着することで、プロテインキナーゼC系の活性化の伝播が起こり、神経細胞全体にわたってシナプス形成の顕著な亢進が起こることが証明された。

2002年，我们的研究团队开发了一项技术，可以利用从Laver Coral克隆的荧光蛋白的特性来标记光线，该技术从Laver Coral克隆，该蛋白质通过紫色（外）光从绿色转化为绿色。事实证明，它可以应用于在神经回路中突出每个神经元的整体情况，并在发育过程中跟踪细胞谱系。此外，绿色和红色状态中枫木蛋白的结构分析表明，由于与附近肽链的裂解相关的结构变化，枫蛋白的发色团从绿色到红色扩散。结论是，肽链裂解是通过吸收紫色（外部）光的枫蛋白的催化活性以及发现蛋白质内发生的光化学的新方面的。 - 我们试图将诸如枫技术等光操作技术纳入显微镜。我们已经开发了一个光学系统，该系统可以通过将数字微龙器设备（从加号放映机中删除）放在普通显微镜的现场停止中，从而获得免费的证明模式。此外，通过结合条纹投影，产生了一个显微镜，可以轻松获取荧光信号的层析成像图像。 - 长期以来，人们一直知道神经元中的突触形成是由神经胶质细胞的存在促进的。问题是“这种影响是由神经胶质粘附因素或体液因素引起的吗？”这是我们第一次系统地证明了以前未经探索的粘合剂效应。已经证明，神经胶质细胞通过整合素粘附于局部神经元，从而导致蛋白激酶C系统的激活传播，从而导致整个神经元的突触形成显着增加。