ATP感受性K+チャネル(Kir6.1)とNa+/K+ポンプの機能的連関

ATP 敏感 K+ 通道 (Kir6.1) 和 Na+/K+ 泵之间的功能关系

• 批准号: 09257240
• 负责人: 河原 克雅
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257240/
• 关键词: K^+チャネル; 腎集合管; Na^+輸送; ミネラルコルチコイド; ミトコンドリア

ATP感受性k^+チャネルサブユニットuK_<ATP->1(Kir6.1)の腎尿細管における発現を、免疫組織学的手法とウエスタンブロット法により調べた。uK_<ATP->1は、近位尿細管、太いヘンレの上行脚、集合管(皮質>髄質外層>髄質内層)において強く発現していたが、ヘンレループの細い脚には発現が見られなかった。発現量の順位は、従来知られている腎尿細管各セグメントのNa^+輸送能の順位にほぼ一致し、Na^+/K^+ポンプ活性との機能的連関を推測させた。尿細管細胞内の局在性について、共焦点レーザー顕微鏡を使い調べた。核を除く細胞質内に不規則に発現している蛍光像は、uK_<ATP->1が細胞膜(管腔膜、側底膜)および核には存在せず、細胞内小器官に存在することを示唆した。次に、ラット腎皮質をホモジネートし、管腔膜、側底膜、ミトコンドリア分画に分離し、uK_<ATP->1がミトコンドリア分画にのみ存在することを証明した。腎集合管のNa^+輸送は、ミネラルコルチコイド(DOCA)により調節されている。単離した近位尿細管と集合管において、uK_<ATP->1とNa^+/K^+ATPaseの発現量をDOCA存在(1週間)の有無で比較した。結果:近位尿細管においては、uK_<ATP->1とNa^+/K^+ATPaseの発現量は変化しなかったが、集合管において両者はパラレルに増加した。

使用免疫组织学技术和蛋白质印迹研究了肾小管中ATP敏感的k^+通道亚基uK_<ATP->1 (Kir6.1)的表达。 uK_<ATP->1在近曲小管、Henle升支粗肢、集合管（皮质>外髓质>内髓质）中强表达，而在Henle袢细肢中未观察到表达。 。表达水平的顺序几乎与先前已知的每个肾小管段的Na^+转运能力的顺序一致，表明与Na^+/K^+泵活性的功能关系。使用共聚焦激光显微镜研究肾小管细胞内的定位。显示除细胞核外的细胞质中的不规则表达的荧光图像表明uK_<ATP->1不存在于细胞膜(腔膜、基底外侧膜)或细胞核中，但存在于细胞内细胞器中。接下来，我们将大鼠肾皮质均质化，并将其分为管腔膜、基底外侧膜和线粒体部分，并证明 uK_<ATP->1 仅存在于线粒体部分中。肾集合管 Na^+ 转运受盐皮质激素 (DOCA) 调节。在存在和不存在 DOCA 的情况下（1 周），比较分离的近端小管和集合管中 uK_<ATP->1 和 Na^+/K^+ATPase 的表达水平。结果：在近曲小管中，uK_<ATP->1和Na^+/K^+ATPase的表达水平没有变化，但在集合管中却平行增加。

项目成果

Kawahara,K.: "Potassium transport and potassium channels in the kidney tubules." Jpn.J.Physiol.47. 1-10 (1997)

Kawahara,K.：“肾小管中的钾转运和钾通道。”

Suko,Y.: "Nuclear and cytosolic calcium signaling induced by extracellular ATP in rat kidney inner medullary collececting duct cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.234. 224-229 (1997)

Suko，Y.：“大鼠肾内髓质集合管细胞中细胞外 ATP 诱导的核和胞质钙信号传导。”

Suzuki,N.: "Sapecin B,a novel fly toxin,blocks macroscopic K^+ currents in the GH_3 rat pituitary cell line." Am.J.Physiol.273. C289-296 (1997)

Suzuki,N.：“Sapecin B 是一种新型蝇毒素，可阻断 GH_3 大鼠垂体细胞系中的宏观 K^ 电流。”