ガングリオシド糖鎖合成酵素遺伝子の癌細胞特異的発現機構と関連転写因子の解析

神经节苷脂糖链合酶基因及相关转录因子癌细胞特异性表达机制分析

• 批准号: 08265249
• 负责人: 古川 圭子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265249/
• 关键词: ガングリオシド; 糖転移酵素; ゲノム遺伝子; 転写調節; プロモーター; エンハンサー

神経外胚葉系の腫瘍や成人T細胞白血病及びHTLV-I感染細胞においては、酸性糖脂質(ガングリオシド)であるGM2やGD2の特徴的な発現が認められる。私達は癌化に伴う糖鎖変異を分子レベルで明らかにすることを目的として、GM2/GD2を合成するGM2/GD2合成酵素(β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase)ゲノム遺伝子の構造と転写調節領域解析を進め、以下の結果を得た。1)本酵素遺伝子は全長8kbp以上で、少なくとも11個のエキソンから成り、coding領域は第2エキソンから第11エキソンに存在した。2)本酵素遺伝子発現メラノーマ細胞株において、転写開始点は少なくとも3箇所同定され、これらの転写開始点より始まる3個のエキソン1a、-1b、-1cはalternativeにスプライスし、エキソン2に結合していた。また、各々の上流域にはプロモーター活性が検出された。3)エキソン1a及びエキソン1bの上流のプロモーター活性はイントロン1により著しく上昇した。4)イントロン1中の5'側約200bpの領域にSV40のプロモーター活性を約8倍増強するエンハンサー活性が確認された。今後、エンハンサーおよびサイレンサーを含めたこれらの遺伝子発現調節に働く転写因子群の同定を進めたい。また、癌の特異的遺伝子治療法への応用の為に、本酵素遺伝子の癌細胞特異的発現を担うプロモーター/エンハンサーと、殺細胞遺伝子を組み合わせたレトロウイルス発現ベクターを作製し、本酵素発現細胞株に導入した。その結果、導入細胞株は、ガンシクロビルに対する感受性を獲得した。今後、ウイルス溶液を作製し、本酵素遺伝子高発現細胞株および非発現細胞株における殺細胞効果の比較、更にはin vivoにおける抗腫瘍効果について検討を進める。

在外部体现的成年T细胞白血病和HTLV-I感染细胞的肿瘤中，识别为GM2和GD2的特征表达，该表达是一种酸性糖脂质（神经节）。为了阐明与分子水平上与癌症相关的糖链突变，GM2/GD2合成酶（β1,4-N-乙酰甲基乳酰胺基转移酶）合成GM2/GD2是基因组基因组基因组基因组的结构和转移调节区域的合成进行分析并获得以下结果。 1）酶基因超过8kbp，由至少11个exonson组成，并且在第十一Exison的第二个外移中存在编码区域。 2）该酶遗传表达黑色素瘤细胞储量至少有三个转移点，三个Extrason 1a，-1b，-1c从这些转移起点开始到替代方案，并与Exison 2结合。在上游范围内检测到启动子活动。 3）内含子1的外显子1a和外显子1b上游的启动子活性显着增加。 4）内含子1在约200 bp的5'侧中，增强活性使SV40的启动子活性增加了约8次。将来，我想继续识别用于这些基因表达的转录因子组，包括增强子和消音器。此外，对于癌症特异性基因疗法的应用，将促进剂/增强子组合为负责酶基因的癌细胞特异性表达和细胞基因的逆转录病毒表达载体，并创建了该酶表达细胞。引入股票。结果，入门细胞库存已经对Gunsclovir敏感。将来，将创建一种病毒溶液，并将检查当前细胞中较高的酶基因中细胞和非表达细胞量的比较，并将检查体内抗肿瘤作用。

项目成果

Okada,M.: "High expression of ganglioside GD3 synthase gene in adult T cell leukemia cells unrelated to the gene expression of human T lymphetrepic uirus type" Cancer Res.56. 2844-2848 (1996)

Okada,M.：“成人 T 细胞白血病细胞中神经节苷脂 GD3 合酶基因的高表达与人 T 淋巴细胞型基因表达无关”Cancer Res.56。

Yamamoto,A.: "Heterogeneity in the expression patttern of two ganglioside synthase genes during niouse brain development." J.Neurochem.66. 26-34 (1996)

Yamamoto,A.：“在大脑发育过程中，两种神经节苷脂合酶基因的表达模式存在异质性。”

Okada,K.: "Independent and differential expression of two isotypes of human Nm23:Analysis of the pronacterregion of the nm23-H1 and H2 genes." Oncogene. 13. 1937-1943 (1996)

Okada,K.：“人类 Nm23 两种同种型的独立和差异表达：nm23-H1 和 H2 基因的原核区域分析。”

Furukawa,K.: "Genomic organization and chromosomal assignment of the human β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferise gene:Identification of multiple transcription units." J.Biol.Chem.271. 20836-20844 (1996)

Furukawa, K.：“人类 β1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因的基因组组织和染色体分配：多个转录单位的鉴定。J.Biol.Chem.271（1996）。”

Takamiya,K.: "Mice with disrupted GM2/GD2 synthase gene lack complex gangliosides,but exlubit only subtle defects in their nervous system." Proc.Natl.Acad.Sec.USA. 93. 10662-10667 (1996)

Takamiya,K.：“GM2/GD2 合酶基因被破坏的小鼠缺乏复杂的神经节苷脂，但其神经系统仅表现出细微的缺陷。”