糖鎖合成酵素遺伝子の癌細胞特異的発現制御領域の解析とその遺伝子治療への応用

糖链合酶基因癌细胞特异性表达控制区分析及其在基因治疗中的应用

• 批准号: 09255221
• 负责人: 古川 圭子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255221/
• 关键词: 糖鎖合成酵素遺伝子; ゲノム遺伝子; 発現調節領域; 遺伝子治療

1)GM2/GD2合成酵素遺伝子のプロモーター/エンハンサー領域と殺細胞遺伝子を連結したレトロウイルス発現ベクターによる殺細胞効果の検討GM2/GD2合成酵素遺伝子のプロモーター/エンハンサー領域と殺細胞遺伝子(単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSV-TK)遺伝子)を連結したレトロウイルス発現ベクターを作製した。これを、本酵素遺伝子の高発現細胞株(AS:アストロサイトーマ)に導入し、stable transfectantを樹立した。細胞培養溶液に種々の濃度のガンシクロビル(GCV)を添加し細胞増殖抑制効果を検討した結果、親株ではGCV:5x10^<-4>Mにおいても、増殖抑制が認められないが、stable transfectantにおいては、GCV:5x10^<-6>Mで70%以上の増殖抑制が認められた。同様に、本酵素遺伝子の低発現細胞株MeWoに上記のレトロウイルスベクターを導入したstable transfectantを樹立した。この場合は、GCV添加による増殖抑制がほとんど認められなかった。更に、同一コピー数のTK遺伝子導入ASおよびMeWoについてGCVに対する感受性を比較検討した結果、TK遺伝子導入ASにおいては、GCVによる増殖抑制が認められたが、TK遺伝子導入MeWoでは、ほとんど抑制が認められなかった。2)GD3合成酵素(α2,8-sialyltransferase)ゲリム遺伝子の単離と発現調節領域の解析ヒトゲノム遺伝子BACライブラリーより、GD3合成酵素ゲノム遺伝子を単離し、本酵素遺伝子の5'上流域約1.8kbのシークエンスを行った。その結果、本酵素遺伝子の上流域にはTATAボックスはなく、GCボックス配列が存在した。また、既知の転写因子結合モチーフを検索した結果、AML1、c-Myb、v-Myb、GATA、Sp1等の転写因子結合モチーフが存在した。

1）连接和细胞基因的GM2/GD2合成酶基因启动子/增强剂区域和逆转录病毒表达载体，研究细胞效应Gm2/gd2合成酶基因启动子/增强酶启动子/增强酶区域和细胞基因（简单疱疹病毒中）创建了连接到激酶（HSV-TK）基因）。这被引入主要酶基因中的高主要细胞库存（AS：Astransite），并建立了稳定的转染剂。由于在细胞培养溶液中添加了各种浓度的Gunschlovir（GCV）并检查细胞增殖抑制效应，因此母体应变不允许在GCV中抑制GCV：5x10^<-4> M，而是在稳定中转染剂，GCV：5x10^<-6> M的生长超过70％。同样，在酶基因的低电流细胞库存中具有上述逆转录病毒载体的稳定转染剂。在这种情况下，由于GCV的添加几乎没有增长的抑制作用。此外，由于比较和检查对TK基因引入AS和MEWO的GCV的敏感性，因此允许由于GCV而抑制TK基因引入，但TK基因引入MEWO几乎被抑制了。不是。 2）GD3合成酶（α2,8-溶解酶）分析GERIM基因和表达配位面积単ヒゲ，，，，，，，，结果，在酶基因的上范围内没有塔塔盒，并且有一个GC盒序列。由于搜索已知转移因子结合基序，转录因子结合基序（例如AML1，C-MYB，V-MYB，V-MYB，GATA，SP1等）都存在。

项目成果

Furumoto Satoshi: "Genetic remodeling of gangliosides resulted in the enhanced reactions to the foreign substances in skin." Glycobiology. 7. 1111-1120 (1997)

Furumoto Satoshi：“神经节苷脂的基因重塑导致对皮肤中异物的反应增强。”

Ikeda Hiroaki: "Mutated MAP kinase;A tumor rejection antigen of mouse sarcoma." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 6375-6379 (1997)

Ikeda Hiroaki：“突变的 MAP 激酶；小鼠肉瘤的肿瘤排斥抗原。”

Nagata Yasuhiro: "Peptides derived from a wild-type murine proto-oncogene c-erbB-2/HER2/neucan induce CTL and tumor supression in syngeneic hosts." J.Immunol.159. 1336-1343 (1997)

Nagata Yasuhiro：“源自野生型鼠原癌基因 c-erbB-2/HER2/neucan 的肽可在同基因宿主中诱导 CTL 和肿瘤抑制。”

Miyazaki Hiroshi: "Expression cloning of rat cDNA of UDP-galactose:GD2 β1,3-galactosyltransferase that determines the expression of GD1b/GM1/GA1." J.Biol.Chem.272. 24794-24799 (1997)

Hiroshi Miyazaki：“确定 GD1b/GM1/GA1 表达的 UDP-半乳糖：GD2 β1,3-半乳糖基转移酶的大鼠 cDNA 的表达克隆。”J.Biol.Chem.272（1997）。