Analysis of the compositions of lipid rafts and extracellular vesicles containing cancer-associated sugar chains, and their regulatory functions of microenvironments

含癌症相关糖链的脂筏和细胞外囊泡的组成及其微环境调节功能分析

• 批准号: 21K06828
• 负责人: 古川 圭子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Chubu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06828/
• 关键词: 細胞外分泌小胞; 癌関連糖鎖; 細胞接着; 細胞増殖; 脂質ラフト; 癌微小環境; 微小環境; 細胞外分泌小胞; 癌関連糖鎖; 細胞接着; 細胞増殖; 脂質ラフト; 癌微小環境; 微小環境

私達は、癌細胞膜の酸性スフィンゴ糖脂質が、シグナル分子の細胞膜ミクロドメイン（脂質ラフト）への局在を制御してシグナルの活性化と悪性形質の増強に働くことを明らかにしてきた。近年、私達は、エクソソームとよばれる細胞外分泌小胞(EV)の構成脂質には脂質ラフト成分が多く含まれることを明らかにした。本研究では、癌関連酸性スフィンゴ糖脂質を含有するEVの構成分子の特性と癌微小環境における役割を明らかにする。そのために、各種の酸性糖脂質糖鎖を発現するEVの構成分子を比較検討した。具体的には、酸性糖脂質のGM3のみを発現するヒトメラノーマ細胞株SK-MEL-28-N1細胞に各種の糖鎖合成酵素遺伝子を導入して作製した糖鎖改変細胞（コントロール（GM3(+)）細胞、GD3(+)細胞、GD2(+)細胞、GM2(+)細胞、GM1(+)細胞）を用い、その細胞培養上清から超遠心法によりEVを回収した。これらのEVについて、Tim4-beadsを用いたフローサイトメトリーにより糖脂質を解析した結果、細胞と同じ糖脂質がEVでも強く発現していた。EVの分泌量をタンパク量で比較検討した結果、各EVで差異は認められなかった。一方、癌関連糖鎖であるGD3またはGD2を発現するEVにおいては、EVマーカー分子であるCD63, TSG101, 及びAlix の強い発現が認められた。CD9及びCD81については、各EVで同程度の発現であった。Nano Sightによる粒子径測定の結果、いずれのEVも約100nmであった。上記の各種EVマーカー分子の脂質ラフト局在を解析した結果、各分子のラフト局在とEVにおける発現レベルは相関しなかった。EVの生物活性については、GD2発現EVをコントロール細胞に添加した結果、細胞の増殖性と接着性の亢進が認められた。現在、そのメカニズムについて解析中である。

我们已经表明，癌细胞膜中的酸性糖磷脂调节信号分子在细胞膜微区（脂质筏）（脂质筏）中的定位，并作用于信号激活和增强恶性性状。近年来，我们透露，称为外泌体的细胞外分泌囊泡（EV）含有大量脂质筏成分。这项研究揭示了含有癌症相关酸性糖脂果脂的EV组成分子的特性及其在癌症微环境中的作用。为此，我们比较并检查了表达各种酸性糖脂糖的电动汽车的组成分子。具体而言，糖基化修饰细胞（对照（GM3（+）），GD3（+）细胞，GD2（+）细胞，GM2（+）细胞，GM2（+）细胞和GM1（+）和GM1（+）细胞）可用于将各种糖基化酶基因与人类杂种型GMER3 contrectip转移到人类杂种型GM3-N1-N1 contrecol中，这些糖基-28-N1-N1 contic contiC contrecol contrecol contrecol contrecol contrecol contrecol contrecol contrecol contrectip contrecol。通过超速离心的细胞培养上清液。当使用TIM4-珠通过流式细胞仪分析糖脂时，与细胞在EV中强烈表达的糖脂相同。在比较和检查蛋白质含量的EV分泌量之后，在电动汽车之间未发现差异。另一方面，在表达与癌症相关的聚糖GD3或GD2的EV中观察到EV标记分子CD63，TSG101和ALIX的强表达。 CD9和CD81在每个EV中以相似的水平表达。使用纳米瞄准镜的粒度测量表明，所有电动汽车均为约100 nm。通过分析上述各种EV标记分子的脂质筏定位​​，每个分子的筏定位和EV中的表达水平无关。关于电动汽车的生物学活性，将表达GD2的EV添加到对照细胞中，并观察到细胞增殖和粘附。该机制目前正在分析中。