腫癌拒絶の標的分子としてのストレス蛋白質とその免疫学的機構の解明

阐明应激蛋白及其作为肿瘤排斥靶分子的免疫机制

基本信息

批准号：
07253222
负责人：
佐藤昇志
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07253222/
关键词：
ストレス蛋白質熱ショック蛋白質 T細胞抗原ペプチド pRb 癌免疫

项目摘要

腫瘍拒絶の標的分子としてのストレス蛋白質(hsp)の役割りとその分子機構につき、今年度は次の3点を明らかにした。1)70kDa hspの細胞表面発現:我々は数年前に70kDa hspのうち、70hscと思われる分子がH-ras癌遺伝子で形質転換したラット線繊芽細胞表面に発現することを単クローン抗体(mAb)♯067を用いて明らかにした。その後、70hsc特異的なmAb NT22を開発したが、これもDaudi細胞等のE-Bウイルスを用いた形質転換細胞株、あるいはHeLa細胞などの上皮性腫瘍株細胞表面と反応した。今年度はさらに別な2種類の(A15、2G10)の抗70kDa hsp mAbを開発し、細胞表面の反応性をみた。その結果やはり、これら2つのmAbともにDaudi、HeLaなどと反応した。現在、これらすべての抗70kDa hsp mAbをもちいてその各々の分子を分子クローニングすることを試みている。そうすることにより70kDa hspの細胞表面発現機構を明らかに出来ると思われる。2)細胞の癌化で発現する70kDa hsp分子のT細胞との反応機構:mAb♯067により認識される分子はラット70hsc様の分子であり、CD3^+,4^-,8^-,TCRαβ^-,NKR-PI^-のT細胞と反応した。この時、前者は細胞分裂の著しいある特定の細胞由来の抗原ペプチド(分子量5,000以下)と複合体を形成することが必要となった。今後は、この抗原ペプチドの1次構造決定と、70hscとの結合を明らかにすることにより、70kDa hspを用いて腫瘍拒絶の誘導がいかに可能かの解析が重要である。3)70hscと基質蛋白分子の結合:我々は70hscと結合する基質蛋白分子としてpRb(網腫芽細胞腫蛋白)に注目し、70hscとの結合機構を解析した。pRbの様々なdeletion mutantをGST-fusion proteinとして作製し、70hscとの結合をみた。その結果、pRbN末301-372の部分に70hscとの結合活性があり、さらにこの部分の合成アミノ酸を作製したところ、331-340の部分に最も結合活性が高いことが認められた。この部分には、奇数番目に疏水性の高いアミノ酸が配置されており、他の70kDa hspであるBipの基質結合モチーフと同様な特徴が認められた。今後はこれらのモチーフが70kDa hspと結合する基質蛋白質に共通にみられるのか否か、結合親和性にヒエラルキーがどの程度存在するのかなどを明らかにする必要がある。また、多少免疫学的観点から離れるがhsc70とpRbの結合の生物学的な意味をpRbのbreakdownに焦点をあて解明する必要がある。

今年，我们揭示了有关应激蛋白（HSP）作为肿瘤排斥及其分子机制的靶标分子的作用的三个点。 1）70 kDa Hsp的细胞表面表达：几年前，我们已经证明了70 kDa HSP（一种被认为是70 HSC的分子）在大鼠linacoil-over的表面上表达了使用单克隆抗体（MAB）＃067的大鼠linacollasts的表面。随后，开发了70HSC特异性的mAb NT22，它也使用诸如Daudi细胞的E-B病毒或上皮细胞（如HeLa细胞）的细胞表面与转化的细胞系反应。今年，我们开发了另外两种类型的抗70KDA HSP MAB（A15，2G10）抗70KDA HSP mAb，以确定细胞表面反应性。结果，这两个mab都与daudi，hela和其他人反应。当前，我们正在尝试用所有这些抗70kDa HSP mAb的分子分子克隆这些分子。这可能揭示了70KDA HSP的细胞表面表达机制。 2）在癌细胞癌中表达的70KDA HSP分子的反应机制：MAB＃067识别的分子是一种大鼠70HSC样分子，与CD3^+，4^ - ，8^ - ，TCRαβ^ - 和NKR-PI^ - T细胞反应。目前，前者有必要形成具有源自具有显着细胞分裂的特定细胞的抗原肽（分子量低于5,000）的复合物。通过确定该抗原肽的主要结构及其与70HSC的结合，可以分析如何使用70KDA HSP诱导肿瘤排斥。 3）70HSC和底物蛋白分子的结合：我们集中在PRB（网状蛋白）作为与70HSC结合的底物蛋白分子上，并分析了70HSC的结合机制。 PRB的各种缺失突变体作为GST融合蛋白制备，并结合到70HSC。结果，PRBN末端部分301-372具有与70HSC的结合活性，当制备合成氨基酸时，发现结合活性在331-340部分中最高。该部分包含具有较高水差的奇数氨基酸，并且具有与其他70KDA HSP BIP的底物结合基序相似的特征。将来，有必要阐明这些基序是否是在结合70KDA HSP的底物蛋白中通常发现的，以及在结合亲和力中存在层次结构的程度。此外，尽管从免疫学的角度有些遥不可及，但有必要阐明HSC70和PRB结合的生物学意义，重点是PRB分解。