予備細胞培養系の3次元培養による子宮頚部多段階発癌過程の解析

利用初步细胞培养系统3D培养分析宫颈多步癌变过程

• 批准号: 06280239
• 负责人: 平井 康夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06280239/
• 关键词: 子宮頚癌; 予備細胞; HPV遺伝子; 悪性転換; 3次元培養; がん抑制遺伝子; 多段階発癌

子宮頚部偏平上皮癌の大部分は偏平一円柱上皮接合部および円柱上皮下に分布する予備細胞が発生母地となり、上皮変異形成、上皮内癌を経て浸潤癌に移行するとされている。そこで、子宮頚癌の発癌過程解明のためには、我々が開発維持しているヒト子宮頚部予備細胞由来と考えられる培養細胞系が非常に有用と考え、まず、本細胞の細胞生物学的特性を検討した。本細胞は、病理組織学的に異常なしと判断された子宮頚部の一部より樹立され、長期間の継代培養が可能であった。染色体構成はほぼ2倍体で、HPVゲノムは検出されなかった。さらに、ケラチンサブタイプの蛍光免疫細胞学的方法及電顕での観察より、偏平上皮系及び腺系の両方向への分化が示された。従って、本細胞は予備細胞類似の性格を有する培養細胞系と判断された。本細胞に対する複数の遺伝子変化によるトランスフォーメーションは、子宮頚癌の発癌過程のin vitroのモデルになると考え、まず、本細胞に対し16型HPV.DNAの導入を試みこれに成功した。16型HPVを導入した予備細胞は、3次元培養及び細胞遺伝学的方法で解析中である。今後はさらに、既知の癌抑制遺伝子の発現を制御するなどの遺伝子操作により本細胞のトランスフォーメーションを試み、試験管内での多段階発癌過程の再現をめざす。遺伝子操作を加えた予備細胞は3次元培養法を用いて形態学的に検討すると同時に、浸潤能を反映するプロテアーゼ活性を解析することにより、子宮頚部の多段階発癌過程におけるHPV遺伝子発癌やがん抑制遺伝子変異の役割の同定を試みたい。

大多数宫颈鳞状细胞癌被认为起源于分布在鳞状柱状上皮交界处和柱状上皮下方的储备细胞，并通过上皮突变形成和上皮内癌进展为浸润性癌。因此，为了阐明宫颈癌的致癌过程，我们认为我们开发和维护的被认为源自人类宫颈储备细胞的培养细胞系统是非常有用的。这些细胞是从组织病理学上被判断为正常的子宫颈部分建立的，并且可以长期传代培养。染色体组成几乎为二倍体，未检测到HPV基因组。此外，使用荧光免疫细胞学方法和电子显微镜观察角蛋白亚型揭示了分化为鳞状上皮和腺体系统。因此，该细胞被判断为具有与储备细胞相似特征的培养细胞系。我们相信，通过多重基因改变对这些细胞进行转化可以作为宫颈癌致癌过程的体外模型，首先，我们尝试将 HPV 16 型 DNA 引入这些细胞并取得了成功。目前正在使用三维培养和细胞遗传学方法对引入 HPV 16 型的储备细胞进行分析。未来，我们将进一步尝试通过基因操作改造这些细胞，例如控制已知抑癌基因的表达，以期在体外重现多步骤的致癌过程。利用三维培养方法对基因工程备用细胞进行形态学检查，同时分析反映侵袭能力的蛋白酶活性，以探讨宫颈多步癌变过程中HPV基因致癌及癌症的发生。我想尝试确定抑制基因突变的作用。