造血系構築とくにマクロファージ分化におけるIL-6シグナルの解析

IL-6信号在造血系统构建尤其是巨噬细胞分化中的分析

基本信息

批准号：
06277211
负责人：
松田正
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06277211/
关键词：
IL-6 gp130 Jak STAT チロシンキナーゼ Sak

项目摘要

IL-6は造血系において、IL-6は、IL-3とともに多能性幹細胞コロニー形成を誘導し、巨核球に対してはその成熟化を誘導する。また、IL-6はマウスの骨髄性白血病細胞株M1のマクロファージへの分化を誘導する因子として注目されている。IL-6受容体は分子量80kDaのIL-6結合分子とそのシグナル伝達分子であるgp130により構成される。gp130分子の細胞内ドメインにはチロシンキナーゼ等のエフェクター分子に類似した構造は認められず、gp130分子を介するシグナル伝達系を明らかにするためにはgp130会合分子の同定は必須である。申請者らは非受容体型チロシンキナーゼであるJAKファミリーキナーゼならびにその下流に存在すると考えられるSTAT分子に注目し、それらに対する特異的抗体を用いた免疫沈降法にてIL-6刺激によるチロシンリン酸化の有無を検討した。JAKキナーゼ及びSTAT蛋白に対する抗体は合成ペプチドをウサギに免疫することにより得た。マウスgp130分子を高発現させたマウスプロB細胞株BAFm130細胞あるいはIL-6によってマクロファージへの分化が誘導されるY6細胞をIL-6と可溶性IL-6レセプターa鎖で刺激し、NP-40溶液で可溶化後、抗ホスホチロシン抗体あるいは抗JAK抗体、抗STAT抗体で免疫沈降したのち抗ホスホチロシン抗体によるウエスタンブロットを行った。BAFm130においたはgp130分子を刺激することにより種々の蛋白のチロシンリン酸化が誘導された(BBRC200:821,1994)。また、gp130刺激でJAKキナーゼとSTAT分子のチロシンリン酸化が観察された。さらに、JAKキナーゼは構成的にgp130分子に会合していることが明らかとなった。加えて、抗STAT抗体による免疫沈降物中には分子量72kDaの新たなチロシンキナーゼ(p72^<sak>)(p72STAT-associatcd tyrosinc kinasc)が含まれることを明らかにした。また、p72^<sak>のチロシンキナーゼ活性はgp130刺激で上昇することを明らかにした(Blood83:3457,1994)。さらに、p72^<sak>チロシンキナーゼのチロシンリン酸化はIL-6によってマクロファージへの分化が誘導されるY6細胞においてもチロシンリン酸化が誘導されることや他の造血系サイトカインであるIL-3やG-CSFによっても誘導されることから造血系サイトカインレセプター下流に共通に存在するチロシンキナーゼであると考えられる。現在、このp72^<sak>のチロシンキナーゼの単離、精製を試みている。

在造血系统中，IL-6与IL-3一起诱导多能干细胞菌落的形成，并诱导其对巨核细胞的成熟。 IL-6还吸引了注意力，这是诱导髓样白血病细胞系M1分化为小鼠巨噬细胞的因素。 IL-6受体由IL-6结合分子组成，分子量为80 kDa及其信号分子GP130。 GP130分子的细胞内结构域未显示类似于效应分子（例如酪氨酸激酶）的结构，而GP130缔合分子的鉴定对于通过GP130分子阐明信号转导系统至关重要。申请人专注于JAK家族激酶，一种非受体酪氨酸激酶以及被认为存在于酪氨酸激酶下游的Stat分子，以及使用特定抗体使用特定抗体对其进行免疫沉淀而通过免疫沉淀而存在或不存在IL-6刺激。通过用合成肽免疫兔子来获得针对JAK激酶和STAT蛋白的抗体。小鼠Pro B细胞系BAFM130细胞具有高表达小鼠GP130分子或Y6细胞，其中IL-6和可溶性IL-6受体A链诱导巨噬细胞，并用NP-40溶液溶解，并用抗磷酸盐抗抑制剂，抗磷酸盐，Antibibibibibibibibibibibibibib溶液溶液。抗磷酸酪氨酸抗体。在BAFM130中，刺激GP130分子诱导各种蛋白质的酪氨酸磷酸化（BBRC200：821，1994）。此外，在GP130刺激后观察到JAK激酶和Stat分子的酪氨酸磷酸化。此外，据揭示了JAK激酶与GP130分子的组成性相关。此外，据表明，具有抗STAT抗体的免疫沉淀含有一种新的酪氨酸激酶（P72^<sak>）（p72Stat-associatcd酪蛋白Kinasc），分子量为72 kDa。我们还发现，在GP130刺激时，P72^<sak>的酪氨酸激酶活性增加（血液83：3457，1994）。此外，p72^<sak>酪氨酸激酶的酪氨酸磷酸化被认为是一种酪氨酸激酶，通常呈现造血细胞因子受体的下游，因为它在Y6细胞中诱导，在Y6细胞中诱导，在IL-6中，IL-6中的巨噬细胞分化为巨噬细胞，也是由其他血清cy-cinef and-Cinef and-Cinef and-Cinef and-Cinef and-cintokietic cytokocoietic cytokocoietic cytok andf。目前，我们正在尝试隔离和净化此P72^<sak>酪氨酸激酶。