細胞質膜蛋白質の構造形成・アセンブリー

细胞质膜蛋白的结构形成和组装

基本信息

批准号：
06248224
负责人：
小椋光
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

FtsH蛋白は真核細胞の265プロテアソームの制御サブユニットのいくつかと相同なATPaseドメインを持ち、さらにZnメタロプロテアーゼに見られるHEXXHモチーフを持つ膜蛋白である。また遺伝的にλファージの溶菌・溶原化を制御するCII蛋白の分解に関わることが示され、Lon、Clpプロテアーゼとは異なる新しいタイプのATP依存性プロテアーゼであることが示唆された。CII蛋白を安定化するCIII蛋白は同時に熱ショック誘導に働くσ32を安定化することからσ32がFtsHプロテアーゼの細胞内基質である可能性が強く示唆された。FtsHを精製し、in vitro系で、予想したようにFtsHがATPase活性とσ32を分解するプロテアーゼ活性を持つことを明かにした。このFtsHによるσ32の分解はATPアナグロでは起こらなかった。FtsHのプロテアーゼ活性はZn2+により促進され、重金属のキレート剤o-phenanthrolineにより強く阻害された。興味深いことに26Sプロテアソームを阻害するvanadatによりFtsHのATPase活性およびプロテアーゼ活性の阻害が確認された。σ32以外のσ因子のうちσ70とσ38はFtsHによる分解は認められなかった。一方、in vivoにおいてもftsH変異によるσ32の安定化と蓄積を観察した。以上の結果より、FtsHは膜結合型のATP依存性メタロプロテアーゼであり、その基質の一つがσ32であることが明かとなった。

FtsH 蛋白是一种膜蛋白，具有与真核 265 蛋白酶体的一些调节亚基同源的 ATPase 结构域以及锌金属蛋白酶中发现的 HEXXH 基序。它还被证明在遗传上参与 CII 蛋白的降解，从而控制 λ 噬菌体的裂解和溶原化，表明它是一种新型 ATP 依赖性蛋白酶，不同于 Lon 和 Clp 蛋白酶。稳定 CII 蛋白的 CIII 蛋白也能稳定诱导热休克的 σ32，强烈表明 σ32 是 FtsH 蛋白酶的细胞内底物。我们纯化了 FtsH，并在体外证明，正如预期的那样，FtsH 具有 ATP 酶活性和降解 σ32 的蛋白酶活性。 FtsH 对 σ32 的这种降解并未发生在 ATP 类似物中。 FtsH 的蛋白酶活性被 Zn2+ 促进，并被重金属螯合剂邻菲咯啉强烈抑制。有趣的是，抑制26S蛋白酶体的钒会抑制FtsH的ATP酶和蛋白酶活性。在除σ32之外的σ因子中，没有观察到σ70和σ38被FtsH降解。另一方面，我们观察到由于体内 ftsH 突变导致 σ32 稳定和积累。上述结果表明FtsH是一种膜结合的ATP依赖性金属蛋白酶，其底物之一是σ32。