筋細胞融合におけるNCAM糖鎖の役割

NCAM 聚糖在肌肉细胞融合中的作用

基本信息

批准号：
05274205
负责人：
梅田真郷
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05274205/
关键词：
NCAM GPI-アンカー筋細胞分化融合

项目摘要

1)NCAMのGPI-アンカー糖鎖構造C2C12細胞の分化誘導及び筋管形成に伴い、分子量150KDaのGPI-アンカー型NCAMが特異的に出現することが明かとなった。そこで分化誘導したC2C12細胞を3H-inositol存在下で培養し、NCAMを単離したのち3H-inositol標識GPI糖鎖を調製し、各種exoglycosidaseによる逐次消化とBio-gel P-4カラム上での溶出位置の変化より糖鎖構造の推定を行った。その結果、GPI-アンカー糖鎖のコア構造にβ1-4でGalNAcが付加しているものと、していないもの、の2種の分子種よりなることが明かとなった(下図)。また、C2C12細胞には、膜貫通型と2種のGPI-アンカー型のNCAMが発現しているが、これらの分子はいずれも各種レクチンに対する反応性が異なることから、生合成の過程で異なった糖鎖修飾を受けていることが明かとなった。2)細胞融合欠損株の樹立C2C12細胞の分化誘導と継代、クローニングを繰り返すことにより、細胞融合欠損株2株を樹立した。いずれの細胞株においても膜貫通型のNCAMの発現は親株と同様であったが、分子量150KDaのGPIアンカー型分子の分化に伴う発現は認められなかった。今後、これらの細胞株を用いて、GPI-アンカー型NCAMの誘導のメカニズム及び筋細胞分化・融合における役割を明かにしたい。

1)NCAM的GPI锚定糖链结构揭示了分子量为150KDa的GPI锚定NCAM随着C2C12细胞的分化和肌管形成的诱导而特异性出现。因此，在3H-肌醇存在下培养分化的C2C12细胞，分离NCAM，制备3H-肌醇标记的GPI糖链，并依次用各种外切糖苷酶消化并在Bio-gel P-4柱上洗脱糖。链结构是根据位置的变化来估计的。结果表明，GPI锚定糖链的核心结构由两种类型的分子组成：一种在β1-4处添加了GalNAc，另一种则没有添加（见下图）。此外，C2C12细胞表达两种类型的NCAM，即跨膜型和GPI锚定型，但这些分子对各种凝集素的反应性不同，这表明它们在生物合成过程中发生了糖基化。 2)细胞融合缺陷株的建立通过C2C12细胞的重复分化诱导、传代和克隆，建立了两种细胞融合缺陷株。在这两种细胞系中，跨膜NCAM的表达与亲本系相似，但在分化过程中未观察到分子量为150 KDa的GPI锚定分子的表达。未来，我们希望利用这些细胞系来阐明 GPI 锚定的 NCAM 的诱导机制及其在肌肉细胞分化和融合中的作用。