細胞複製を制御する遺伝子とMAPキナーゼの相互作用

控制细胞复制的基因和 MAP 激酶之间的相互作用

基本信息

批准号：
04256207
负责人：
西田栄介
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

v-ras p21の発現が誘導されるラット繊維芽細胞を作製し、ras誘導にともないMAPキナーゼが活性化することを明らかにした。その時、MAPキナーゼを活性化する上流の因子であるMAPキナーゼキナーゼもras p21の下流で活性化することを示した。大腸菌に発現した組み換え体ras p21をXenopus未成熟卵ヘマイクロインジェクションすると、MAPキナーゼが活性化すること、また、その上流の因子である45-kDaのMAPキナーゼキナーゼが活性化すること、を明らかにした。以上、2つの実験系から、ras p21の下流のシグナル伝達系にMAPキナーゼキナーゼ/MAPキナーゼが存在することを示すことができた。ras p21からMAPキナーゼキナーゼ/MAPキナーゼに至るシグナル伝達経路を解明するための手段として、無細胞系を確立することを試み、Xenopus卵抽出液を用いることで効率のよい系の確立に成功した。その無細胞系において、v-ras p21の添加によって、45-kDa MAPキナーゼキナーゼ及び42-kDa MAPキナーゼが5分以内に活性化した。その時、MAPキナーゼキナーゼはリン酸化されることで活性化することも明らかになった。すなわち、ras p21とMAPキナーゼキナーゼとの間に少なくとももう一つのキナーゼが存在することがわかった。現在、本無細胞系のさらなる改良を重ねながら、ras p21とMAPキナーゼキナーゼとの間のシグナル伝達系を生化学的に解明することを中心に解析を進めている。

我们生成了诱导 v-ras p21 表达的大鼠成纤维细胞，并揭示了 ras 诱导后 MAP 激酶被激活。当时，我们发现MAP激酶激酶（激活MAP激酶的上游因子）也在ras p21的下游被激活。我们发现，将大肠杆菌中表达的重组 ras p21 显微注射到未成熟的爪蟾卵中会激活 MAP 激酶以及上游因子 45-kDa MAP 激酶。从以上两个实验系统中，我们能够证明MAP激酶/MAP激酶存在于ras p21的下游信号转导系统中。作为阐明从 ras p21 到 MAP 激酶/MAP 激酶的信号转导途径的一种手段，我们尝试建立无细胞系统，并成功使用非洲爪蟾卵提取物建立了有效的系统。在无细胞系统中，添加 v-ras p21 可在 5 分钟内激活 45-kDa MAP 激酶激酶和 42-kDa MAP 激酶。当时还发现MAP激酶激酶是通过磷酸化而激活的。换句话说，发现在ras p21和MAP激酶之间至少存在另一种激酶。目前，在进一步改进这一无细胞系统的同时，我们正在进行分析，重点是从生化角度阐明ras p21和MAP激酶激酶之间的信号转导系统。