MPTPによるパ-キンソニズム発症の生化学的研究

MPTP对帕金森病发作的生化研究

基本信息

批准号：
03263102
负责人：
水上茂樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03263102/
关键词：
MPTP MPP^+ミトコンドリア活性酸素脂質過酸化反応

项目摘要

1.ミトコンドリアを用いた研究。(1)MPP^+によりNADH依存性O_2生成の誘導と脂質過酸化反応の増大。ウシ心筋亜ミトコンドリア粒子にMPP^+を加えると、ド-パミンニュ-ロンのミトコンドリアに存在すると思われる濃度でNADH依存性O_2生成を誘導した。O_2生成は、NADHーユビキノン還元活性がMPP^+で阻害されるのと並行した上昇した。MPP^+は、ADPーFe^<3+>存在下におけるNADH依存性脂質過酸化反応を増大させたが、コハク酸添加により抑制された。この抑制は、内在性ユビキノンの還元と相関していた。これらMPP^+によるO_2生成誘導と脂質過酸化反応の増大は、MPP^+による細胞死と関わっているものと考えられた。(2)MPP^+による脂質過酸化反応の抗NADHーユビキノン還元酵素抗体を用いた研究。パ-キンソン病の際、黒質ミトコンドリアのNADHー2ビキノン還元活性が選択的に低下しており、そのサブユニット量の低下がみられる。一方、ミトコンドリアの脂質過酸化反応により、NADHーユビキノン還元活性がまず低下することが知られている。よって、NADHーユビキノン還元酵素(ComplexI)をウシ心筋から精製し、それに対するウサギ抗体を作成した。この抗体を用いたコントロ-ル亜ミトコンドリア粒子に対するイムノブロットでは、約25本のバンドが認められたが、脂質過酸化反応を起こした粒子では、分子量約2.5万のバンドが消失していた。今後、PCー12細胞をMPP^+で処理した時のComplexIサブユニット動態について検討してゆくつもりである。2.培養ラット褐色細胞腫細胞(PCー12細胞)を用いた研究。培養PCー12細胞にMPP^+を加えると、細胞死がみられた。その半致死量は、約1mMであり、半致死時間は、約48時間であった。ユビキノンのアナログであるアバン(イデベノン)添加は、MPP^+による細胞死を抑制した。

1。线粒体研究。（1）MPP^+诱导NADH依赖性O_2形成并增加脂质过氧化反应。将Mpp^+添加到牛心肌crisbsochondrial颗粒中诱导NADH依赖性O_2产生，以浓度为浓度，该浓度存在于多巴胺元的线粒体中。与MPP^+抑制NADH-泛酮减少活性的同时，O_2的产生同时增加。 Mpp^+在存在ADP-FE^<3+>的情况下增加了NADH依赖性脂质过氧化反应，但由于添加琥珀酸而抑制了NADH的脂质过氧化反应。这种抑制与内源性泛素酮的减少相关。 MPP^+产生O_2的诱导和增加的脂质过氧化反应被认为与MPP^+的细胞死亡有关。（2）使用抗NADH-偶像性还原酶抗体对MPP^+脂质过氧化反应的研究。在帕基森氏病期间，黑质线粒体的NADH-2生物喹酮还原活性有选择地降低，导致其亚基量减少。另一方面，众所周知，由于线粒体脂质的过氧化作用，NADH-偶联活性首先降低。因此，从牛心肌中纯化了NADH的泛氨基还原酶（复合物），并针对它制备兔抗体。在使用该抗体对照对照cistmoch骨颗粒的免疫印迹中，观察到了大约25个带，但是在经过脂质过氧化的颗粒中，分子量约为25,000的颗粒被丢失。将来，当PC-12细胞用MPP^+处理时，我们打算研究复合体亚基的动力学。 2。使用培养的大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC-12细胞）的研究。当将MPP^+添加到培养的PC-12细胞中时，观察到细胞死亡。半致命剂量约为1毫米，半致命时间约为48小时。添加Avan（Idebenone），一种泛氨基酮的类似物，抑制了由MPP^+引起的细胞死亡。