細胞増殖関連遺伝子の転写制御蛋白質の機能構造

细胞增殖相关基因转录控制蛋白的功能结构

基本信息

批准号：
03259217
负责人：
前川利男
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03259217/
关键词：
DNA結合蛋白質転写制御因子機能ドメイン立体構造

项目摘要

私達はすでにCRE結合蛋白質CREーBP1のcDNAクロ-ニングに成功していたので、今年度はこのcDNAを用いてCREーBP1の機能ドメインを解析した。一連の欠失変異、点変異をcDNAに導入し、これらの変異体を培養動物細胞内で発現させ、その転写活性化能を解析した。その結果、CREーBP1はCREを介して転写を活性化する能力を持つこと、N末端付近のメタルフィンガ-構造を含む領域が転写活性化ドメインであることが明かとなった。従来酸性アミノ酸クラスタ-などの複数の転写活性ドメインが同定されているが、メタルフィンガ-構造を含むものは初めて例である。またアデノウイルスのE1Aによる転写活性化をCREーBP1が仲介することを明らかにし、この際CREーBP1のN末端付近のメタルフィンガ-構造が必要であることを示した。また私達はすでにHIVエンハンサ-結合蛋白質HIVーEP1のcDNAクロ-ニングに成功していたので、今年度はHIVーEP1のcDNAをプロ-ブとして2つの関連遺伝子HIVーEP2と3のcDNAをクロ-ニングできた。HIVーEP2の構造を解析した結果、メタルファンガ-構造を持つDNA結合ドメイン、酸性アミノ酸クラスタ-、Ser/Thrに富む領域の3つの部分においてHIVーEP1と2が高い相同性を示し、これらの領域の重要性が示唆された。一方転写制御因子として機能する核内がん遺伝子産物MybとDNAとの相互作用を明らかにするため、MybのDNA結合ドメインの構造をNMRを用いて解析した。その結果、DNAと直接結合する部分はヘリックス・タ-ン・ヘリックスと類似の構造であり、周期的に位置するトリプトファン残基は蛋白質内部の疎水性コアの形成に関与していることが明かとなった。

由于我们已经成功克隆了CRE结合蛋白CRE-BP1的cDNA，今年我们利用该cDNA来分析CRE-BP1的功能域。我们在cDNA中引入了一系列缺失突变和点突变，在培养的动物细胞中表达这些突变体，并分析了它们激活转录的能力。结果表明，CRE-BP1具有通过CRE激活转录的能力，且N端附近含有金属指状结构的区域是转录激活域。尽管先前已鉴定出多个转录激活结构域（例如酸性氨基酸簇），但这是包含金属指结构的第一个例子。我们还揭示了 CRE-BP1 介导腺病毒 E1A 的转录激活，并表明 CRE-BP1 N 末端附近的金属指结构是实现这一点所必需的。另外，由于我们已经成功克隆了HIV增强子结合蛋白HIV-EP1的cDNA，今年我们以HIV-EP1的cDNA为探针，克隆了两个相关基因HIV-EP2和3的cDNA。我能够克隆它。分析HIV-EP2的结构的结果表明，HIV-EP1和2在三个部分显示出高度的同源性：具有金属牙结构的DNA结合域、酸性氨基酸簇以及富含Ser/Thr的区域。提出了该领域的建议。另一方面，为了阐明作为转录调节因子的核癌基因产物Myb与DNA之间的相互作用，使用NMR分析了Myb的DNA结合结构域的结构。结果表明，直接与DNA结合的部分具有类似于螺旋-转角-螺旋的结构，周期性定位的色氨酸残基参与了蛋白质内部疏水核心的形成。