選択的オートファジー受容体p62の核局在による口腔癌の発がんメカニズムの解明

选择性自噬受体p62核定位阐明口腔癌致癌机制

基本信息

批准号：
22H03258
负责人：
柳川徹
金额：
$ 11.15万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03258/
关键词：
p62 口腔がん口腔潜在的悪性疾患

项目摘要

令和4年度は、p62の細胞内での局在異常によるシグナルの変化を確認するために、I．基礎的探索　1) in vitroの実験：核排出シグナル（Nuclear export signal :NES)配列にゲノム編集でミューテーションを入れて作出したΔNES p62-/-マウスより培養系に移した細胞内でのp62の核局在を共焦点レーザー解析で確認を行った。また、細胞抽出液中の可溶性画分と非可溶性画分でのユビキチンおよびp62の量をイムノブロットで確認したところ、ΔNES p62細胞では可溶性画分と非可溶性画分いずれでもp62が増加しており、非可溶性画分ではユビキチンが増大していたことを見出した。2) in vivoの実験： p62の核局在シグナル（Nuclear localization signal : NLS)とNESに変異を加えた ΔNLSおよびΔNES p62遺伝子改変マウスの表現型の解析のために生育曲線を描いたところ有意に体重減少を認め、生存率が異常に低かった。さらに生化学検査のデータの解析から検索したところ生体内で変異が最も大きい組織を探したところ腎臓に変異を認めていた。II．臨床的探索として倫理審査承認後、口腔潜在的悪性疾患(OPMDs)70例を選択し、過去の病理標本のパラフィンブロックよりサンプルを収集し免疫染色を行った。医療記録から収集した臨床指標(年齢，性別，部位，飲酒歴，喫煙歴，部位)と上皮異型の有無を調べ、さらに、核外輸送因子XPO1とYAP、Ki67　、p53の免疫染色を行った。p62については評価方法を、核内、細胞質、凝集群として分類した。OPMDsから癌化を認めた症例は6例で、これらの臨床指標および上皮異型、免疫組織学的指標とp62の核内の局在との関係の統計学的解析を開始した。

2020 年，我们进行了 I.I.基础探索1)体外实验：将细胞中的p62转移至ΔNES p62-/-小鼠的培养系统中，该小鼠是通过基因组编辑突变核输出信号(NES)序列而产生的，通过共聚焦激光分析证实了核定位。另外，当通过免疫印迹确认细胞提取物的可溶性部分和不溶性部分中的泛素和p62的量时，在ΔNES p62细胞中的可溶性部分和不溶性部分中p62均增加，发现不溶性部分中的泛素增加。 2）体内实验：绘制生长曲线，分析p62的核定位信号（NLS）以及NES突变的ΔNLS和ΔNES p62基因修饰小鼠的表型，观察体重减轻情况。异常低。此外，对生化检测数据的分析显示，体内变异最大的组织在肾脏中发现了突变。二. 作为临床探索，经伦理审查批准，选择70例口腔隐匿性恶性疾病（OPMD）病例，从既往病理标本的石蜡块中采集样本并进行免疫染色。检查从病历中收集的临床指标（年龄、性别、地点、饮酒史、吸烟史、地点）以及上皮异型性的有无，此外，进行核输出因子XPO1、YAP、Ki67和p53的免疫染色。关于p62，评估方法分为核组、细胞质组和聚集组。 OPMDs转变为癌症的病例有6例，我们开始统计分析这些临床指标、上皮异型性、免疫组织学指标和p62核定位之间的关系。