選択的オートファジー受容体p62の核局在による口腔癌の発がんメカニズムの解明

选择性自噬受体p62核定位阐明口腔癌致癌机制

基本信息

批准号：
22H03258
负责人：
柳川徹
金额：
$ 11.15万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03258/
关键词：
p62 口腔がん口腔潜在的悪性疾患

项目摘要

令和4年度は、p62の細胞内での局在異常によるシグナルの変化を確認するために、I．基礎的探索　1) in vitroの実験：核排出シグナル（Nuclear export signal :NES)配列にゲノム編集でミューテーションを入れて作出したΔNES p62-/-マウスより培養系に移した細胞内でのp62の核局在を共焦点レーザー解析で確認を行った。また、細胞抽出液中の可溶性画分と非可溶性画分でのユビキチンおよびp62の量をイムノブロットで確認したところ、ΔNES p62細胞では可溶性画分と非可溶性画分いずれでもp62が増加しており、非可溶性画分ではユビキチンが増大していたことを見出した。2) in vivoの実験： p62の核局在シグナル（Nuclear localization signal : NLS)とNESに変異を加えた ΔNLSおよびΔNES p62遺伝子改変マウスの表現型の解析のために生育曲線を描いたところ有意に体重減少を認め、生存率が異常に低かった。さらに生化学検査のデータの解析から検索したところ生体内で変異が最も大きい組織を探したところ腎臓に変異を認めていた。II．臨床的探索として倫理審査承認後、口腔潜在的悪性疾患(OPMDs)70例を選択し、過去の病理標本のパラフィンブロックよりサンプルを収集し免疫染色を行った。医療記録から収集した臨床指標(年齢，性別，部位，飲酒歴，喫煙歴，部位)と上皮異型の有無を調べ、さらに、核外輸送因子XPO1とYAP、Ki67　、p53の免疫染色を行った。p62については評価方法を、核内、細胞質、凝集群として分類した。OPMDsから癌化を認めた症例は6例で、これらの臨床指標および上皮異型、免疫組織学的指標とp62の核内の局在との関係の統計学的解析を開始した。

在2022年，为了确认因细胞中p62异常定位而引起的信号变化，I。基本搜索1）体外实验：通过基因组编辑来确认从ΔNESp62 - / - 小鼠转移到培养系统的细胞中p62的核定位置。共聚焦激光分析用于确认p62在转移到培养系统的细胞中的核定位。此外，当通过免疫印迹确认细胞提取物中可溶性和非溶解馏分中的泛素和p62量时，发现在ΔNESp62细胞中可溶性和非溶性馏分中，p62均增加了p62，而在非溶液中，这种泛素的泛素含量也增加了。 2）体内实验：绘制生长曲线，以分析p62诱导的核定位信号（NLS）和NES中突变的P62修饰小鼠的表型。当绘制生长曲线以分析p62修饰的小鼠时，观察到显着的体重减轻，并且存活率异常低。此外，当我们通过分析生化测试数据进行搜索时，我们搜索了人体中突变最大的组织，并在肾脏中发现了突变。 ii。批准伦理审查作为临床搜索后，选择了70例潜在的口腔恶性病（OPMD）病例，并从先前病理标本的石蜡块中收集样品，并进行免疫染色。还检查了从病历中收集的临床指标（年龄，性别，现场，饮酒史，吸烟史，现场）以及对核出口因子XPO1，YAP，KI67和p53进行了免疫染色，并检查了上皮非典型形式的存在或不存在。对于P62，评估方法被归类为核内，细胞质和聚集组。从OPMD中观察到了六例癌症，并开始对这些临床指标，上皮非典型形式和免疫组织学指标和p62的核定位置之间的关系进行统计分析。