A170欠損マウスを用いた難治性顎骨骨髄炎の修復過程における中枢性骨制御の解析

A170缺陷小鼠难治性颌骨骨髓炎修复过程中骨中枢调节分析

基本信息

批准号：
21659459
负责人：
柳川徹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659459/
关键词：
A170 STAT3 コンディッショナルノックアウト骨芽細胞破骨細胞

项目摘要

本年度の研究実施は以下の通りでおこなった。1)前年度までに制作した、中枢神経系特異的にA170の発現を欠失させたNestin-Cre x A170(f/f)コンディショナルノックアウト(=A170CKO)マウスについて、中枢での発現を免疫染色で調べたところ、A170CKOでは発現の低下が確認された。A170(f/f)をコントロールとし、A170CKOとフェノタイプを調べたところ、過食傾向にあったが、有意な差には至っていない。現在、18週まで体重測定を行っているが、今後のフォローが望まれる。これらを利用して,今後、骨解析を行う予定である。2)中枢神経系でのレプチンシグナルの解析:Ob-Rb受容体とそれに続く転写因子のSTAT3シグナルの異常を調べるため、核移行について免疫染色で蛍光ラベルし共焦点レーザー顕微鏡で局在を調べたところ、レプチン刺激により野生型マウスでは84%の弓状核神経細胞はSTAT3の移行がみられたが、A170nullKOでは27%にとどまった。また、STAT3以外のシグナルの異常をMAPK,p38について調べた。3)パッチクランプ法による神経伝達異常の解析:POMCニューロン特異的にGFPを発現させたeGFP-POMCtgマウスとA170ノックアウトマウスを掛け合わせ、POMCニューロンをGFP標識したA170ノックアウトマウスを作り、3-4週齢のマウスの脳を摘出し、視床下部を含むようにスライスし、ホールセル(全細胞)法でレプチン投与後の静止電位と活動電位を測定したところ、野生型との差はみられなかった。以上より、p62の作用点は中枢性であることが考えられるが、神経伝達には特定できず、今後詳細な検討が必要と考えられた。

今年的研究进行如下。 1) 对 Nestin-Cre x A170 (f/f) 条件敲除 (=A170CKO) 小鼠的中枢神经系统表达进行免疫染色，该小鼠于前一年创建，具有中枢神经系统特异性 A170 表达缺失。研究表明，A170CKO 中的表达减少。当以A170(f/f)为对照，用A170CKO检查表型时，有暴饮暴食的倾向，但没有显着差异。目前，体重测量一直持续到 18 周，但预计未来会进行随访。我们计划将来使用它们进行骨骼分析。 2）中枢神经系统中瘦素信号的分析：为了研究Ob-Rb受体和随后的转录因子STAT3信号的异常，我们用免疫染色对其进行荧光标记以进行核易位，并使用共聚焦激光显微镜检查其定位。在瘦素刺激下，野生型小鼠中 84% 的弓状核神经元表现出 STAT3 迁移，但 A170nullKO 神经元中只有 27% 表现出 STAT3 迁移。此外，还研究了除 STAT3 之外的 MAPK 和 p38 信号异常。 3）膜片钳法分析神经传递异常：将POMC神经元特异表达GFP的eGFP-POMCtg小鼠与A170敲除小鼠杂交，创建A170敲除小鼠，将POMC神经元标记为GFP，然后孵育3-4取出老年小鼠的大脑并切片以包括下丘脑，使用全细胞法测量瘦素后的静息电位和动作电位，没有观察到它们与野生型之间的差异。综上所述，认为p62的作用点是中枢，但从神经传递的角度还不能确定，今后还需要详细研究。