A170欠損マウスを用いた難治性顎骨骨髄炎の修復過程における中枢性骨制御の解析

A170缺陷小鼠难治性颌骨骨髓炎修复过程中骨中枢调节分析

• 批准号: 21659459
• 负责人: 柳川 徹
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659459/
• 关键词: A170; STAT3; コンディッショナルノックアウト; 骨芽細胞; 破骨細胞; A170; STAT3; コンディッショナルノックアウト; 骨芽細胞; 破骨細胞

本年度の研究実施は以下の通りでおこなった。1)前年度までに制作した、中枢神経系特異的にA170の発現を欠失させたNestin-Cre x A170(f/f)コンディショナルノックアウト(=A170CKO)マウスについて、中枢での発現を免疫染色で調べたところ、A170CKOでは発現の低下が確認された。A170(f/f)をコントロールとし、A170CKOとフェノタイプを調べたところ、過食傾向にあったが、有意な差には至っていない。現在、18週まで体重測定を行っているが、今後のフォローが望まれる。これらを利用して,今後、骨解析を行う予定である。2)中枢神経系でのレプチンシグナルの解析:Ob-Rb受容体とそれに続く転写因子のSTAT3シグナルの異常を調べるため、核移行について免疫染色で蛍光ラベルし共焦点レーザー顕微鏡で局在を調べたところ、レプチン刺激により野生型マウスでは84%の弓状核神経細胞はSTAT3の移行がみられたが、A170nullKOでは27%にとどまった。また、STAT3以外のシグナルの異常をMAPK,p38について調べた。3)パッチクランプ法による神経伝達異常の解析:POMCニューロン特異的にGFPを発現させたeGFP-POMCtgマウスとA170ノックアウトマウスを掛け合わせ、POMCニューロンをGFP標識したA170ノックアウトマウスを作り、3-4週齢のマウスの脳を摘出し、視床下部を含むようにスライスし、ホールセル(全細胞)法でレプチン投与後の静止電位と活動電位を測定したところ、野生型との差はみられなかった。以上より、p62の作用点は中枢性であることが考えられるが、神経伝達には特定できず、今後詳細な検討が必要と考えられた。

今年进行的这项研究如下：1）当通过对巢蛋白-CRE X A170（f/f）进行免疫染色的条件敲除（= A170CKO）小鼠进行免疫染色到上一年产生的小鼠时，该小鼠已特别删除A170表达时，该表达式通过A170CKO降低了A170CKO。当将A170（f/f）用作对照时，检查了A170CKO和表型，尽管有暴饮暴食的趋势，但没有显着差异。目前，直到18周才能测量体重，但希望他们将来会跟进。使用这些，将来将进行骨骼分析。 2）中枢神经系统中瘦素信号的分析：为了研究OB-RB受体的STAT3信号和随后的转录因子的异常，通过共斑激光显微镜检查了核易位用免疫染色和定位标记的核易位。瘦素刺激表明，野生型小鼠中有84％的弓形核神经元转移了STAT3，但只有27％的A170Nullko。此外，研究了STAT3以外的其他信号异常，用于MAPK和P38。 3）通过贴片夹具分析神经传递异常：用GFP特异性GFP表达GFP的POMC神经元和A170敲除小鼠的EGFP-POMCTG小鼠组合形成具有GFP标记的POMC神经元的A170敲除小鼠。去除了3-4周大的小鼠的大脑，切成薄片以含有下丘脑，并使用全细胞（总细胞）方法测量了瘦素给药后的静息潜力和动作电位，并且在野生型之间未观察到差异。基于上述情况，人们认为p62的作用点是中心的，但是在神经传递中无法识别，并且将来需要详细的检查。