Development of novel heat-induced cytokine gene therapy against malignant gliomas
针对恶性胶质瘤的新型热诱导细胞因子基因疗法的开发
基本信息
- 批准号:12470286
- 负责人:
- 金额:$ 2.82万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2002
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1) First, we constructed LacZ gene expression vector under the control of heat shock protein 70 (hsp70) promoter (hsp70/LacZ). Then three human glioma cell lines (U251-MG, T98G, NP2) and one mouse glioma cell line (203) were transfected with hsp70/LacZ vector using lipofection method. After selection with G418, the stable transfectants were obtained. Using these transfectants, the expression of beta-galactosidase after heating was measured. The condition of heating was 41℃ for 2h, 42℃ for 1h, or 43℃ for 1h. The results showed that the peak of the beta-galactosidase expression was between 3h and 24h after heating, even though the degree of its expression varied among the cell lines. (In contrast to other cell lines, the expression was positive in U251-MG cells even with 37℃ heating as a negative control.)2) As a next step, we constructed CD40 ligand (CD40L) gene expression vector under the control of hsp70 promoter (hsp70/CD40L). Then we transfected the vector into mouse 203 glioma cell … More or human NP2 glioma cell by lipofection method. After the selection with G418, we obtained stable transfectants, hsp70/CD40L-203 or hsp70/CD40L-NP2. Using each transfectants, we measured the expression of CD40L protein in the supernatant of the culture medium after heating using ELISA. The results revealed that the peak expression of CD40L protein was between 3h and 48h after heating.3) Furthermore, we constructed IFN-gamma gene expression vector under the control of hsp70 (hsp70/IFN-gamma). The stable transfectant with this vector (hsp70/IFN-gamma-203) was established after the selection with G418. Using this transfectant, we measured the expression of IFN-gamma protein in the supernatant of the culture medium after heating at 42℃ for 1h using ELISA. The result showed that the expression peaked at 24h after the heating. There was no expression of IFN-gamma observed with the treatment of 37℃ heating as a negative control.4) Taken together, in most of the glioma cell lines except for U251-MG cells, the peak expression of the inserted gene by heating was observed between 3h and 48h after heating, even though the expression pattern varied depending on each cell line. Therefore, this gene expression system using hsp70 promoter can be a good candidate for heat-inducible gene treatments. Less
1)首先,我们构建了热休克蛋白70(hsp70)启动子控制下的LacZ基因表达载体(hsp70/LacZ),然后构建了三种人胶质瘤细胞系(U251-MG、T98G、NP2)和一种小鼠胶质瘤细胞系( 203)采用脂转染法转染hsp70/LacZ载体,经G418筛选后获得稳定转染子。检测转染子加热后β-半乳糖苷酶的表达情况,加热条件为41℃加热2h、42℃加热1h、43℃加热1h,结果显示,β-半乳糖苷酶表达高峰在3h~3h之间。加热24小时后,尽管其表达程度在细胞系之间有所不同(与其他细胞系相反,即使在U251-MG细胞中表达也是阳性的。 37℃加热作为阴性对照。)2)下一步,我们构建了hsp70启动子(hsp70/CD40L)控制下的CD40配体(CD40L)基因表达载体,然后将载体转染到小鼠203胶质瘤细胞中。或人NP2神经胶质瘤细胞经G418筛选后,获得稳定转染子hsp70/CD40L-203。使用每个转染子,使用ELISA测量加热后的培养基上清液中CD40L蛋白的表达,结果显示CD40L蛋白的峰值表达在加热后3小时至48小时之间。此外,我们构建了hsp70控制下的IFN-γ基因表达载体(hsp70/IFN-gamma),并用该载体构建了稳定转染子。经G418筛选后建立(hsp70/IFN-gamma-203),用ELISA法测定42℃加热1h后培养液上清中IFN-gamma蛋白的表达。 37℃加热处理作为阴性对照,未观察到IFN-γ的表达。4)综合来看,大多数情况下,加热后24小时表达达到峰值。在除U251-MG细胞之外的神经胶质瘤细胞系中,在加热后3小时至48小时之间观察到插入基因的峰值表达,尽管表达模式根据每个细胞系而变化。因此,该基因表达系统使用hsp70。启动子可能是热诱导基因治疗的良好候选者。
项目成果
期刊论文数量(16)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
H.Takahashi: "Successful Treatments of Malignant Glioma in the Elderly by Radiofrequency Interstitial Hyperthermia : A Report of Two Cases"Jpn J Hyperthermic Oncol. 18・3. 157-164 (2002)
H. Takahashi:“射频间质热疗成功治疗老年人恶性神经胶质瘤:两个病例的报告”Jpn J Hyperthermic Oncol 18・3(2002)。
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田中 隆一: "VIII.温熱療法悪性グリオーマの温熱療法"In : 脳神経外科Advanced Practice 5、神経膠腫. 136-141 (2002)
Ryuichi Tanaka:“VIII. 恶性神经胶质瘤的热疗”,见:神经外科高级实践 5,神经胶质瘤 136-141 (2002)。
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田中 隆一: "第7章 温熱療法 最近の進歩"In : 先端医療シリーズ18、脳腫瘍の最新医療. 227-231 (2003)
Ryuichi Tanaka:“第 7 章热疗的最新进展”,载于:高级医学系列 18,脑肿瘤的最新医学治疗 (2003)。
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高橋 英明: "第7章 温熱療法 RF組織内温熱療法"In : 先端医療シリーズ18、脳腫瘍の最新医療. 232-238 (2003)
Hideaki Takahashi:“第 7 章热疗 RF 组织内热疗”,载于:高级医学系列 18,脑肿瘤的最新医疗护理 232-238 (2003)。
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田中 隆一: "脳腫瘍の温熱療法 : 悪性グリオーマのRF組織内加温法"In : 集学的癌治療の研究と臨床,監修. 305-313 (2002)
Ryuichi Tanaka:“脑肿瘤的热疗:恶性神经胶质瘤的射频组织加温方法”,载于:多学科癌症治疗的研究和临床实践,监督305-313(2002)。
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