自然免疫におけるミトコンドリアの翻訳を制御するp32遺伝子の役割の解明

阐明p32基因在调节先天免疫中线粒体翻译中的作用

• 批准号: 25893162
• 负责人: 後藤 和人
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-08-30 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25893162/
• 关键词: 自然免疫

ミトコンドリアは酸化的リン酸化を通じて大半のATP産生を担い、生体におけるエネルギー代謝の中心である。すなわち生物が生存するためにはミトコンドリア依存的ATP産生が必須である。しかしながら、自然免疫におけるミトコンドリアの役割は不明確であるため、本研究において解析を行った。本年度は下記3点をメインに解析を進めていった。(1)MEF細胞株を用いたサイトカイン発現解析　p32ノックアウトMEF細胞を用いて、各種Toll様受容体のリガンドで刺激した。TLR3,4のリガンドに対する反応性は良好であったため、こちらをメインに解析を行った。しかしながらTLR9のリガンドへの反応は不良であるため、解析は困難であった。各種炎症性サイトカインならびにインターフェロンのmRNA量をRT-PCR法を用いて定量解析行った。その解析の結果、ミトコンドリアの機能異常はサイトカインの産生に影響を与えることが示唆された。さらに翌年度も解析を進めていき、その成果を学会、論文などにて発表予定である。(2)組織特異的p32ノックアウトマウスの作製　LysM-Cre knockinマウスと交配して、マクロファージ特異的p32コンディショナルノックアウトマウスを作成した。そのマウスよりp32欠損マクロファージを得て、野生型マクロファージとの比較検討を行った。マクロファージはMEF細胞株とは異なるフェノタイプを示した。これらの結果よりMEF細胞株とマクロファージはp32以外のミトコンドリア関連分子の発現が異なる可能性が示唆された。それらの研究成果に関しては、日本臨床検査医学会にて発表を行った。(3)メタボローム解析　作成したマウスのメタボローム解析用のサンプルを準備した。翌年度に解析を予定している。その内容に関しても上記と同様に発表予定である。

线粒体负责通过氧化磷酸化产生大部分 ATP，并且是生物体能量代谢的中心。换句话说，线粒体依赖性 ATP 的产生对于生物体的生存至关重要。然而，线粒体在先天免疫中的作用尚不清楚，因此我们在本研究中对其进行了分析。今年我们重点分析以下三点。 (1)使用MEF细胞系的细胞因子表达分析 p32敲除的MEF细胞用各种Toll样受体配体刺激。由于TLR3和4与配体的反应性良好，所以我们主要对此进行分析。然而，由于 TLR9 对配体的反应很差，分析一直很困难。使用RT-PCR定量分析各种炎症细胞因子和干扰素的mRNA水平。分析表明线粒体功能障碍会影响细胞因子的产生。分析将在明年继续进行，结果将在学术会议和论文中公布。 (2)组织特异性p32敲除小鼠的产生通过与LysM-Cre敲除小鼠交配产生巨噬细胞特异性p32条件敲除小鼠。我们从这些小鼠身上获得了 p32 缺陷型巨噬细胞，并将其与野生型巨噬细胞进行了比较。巨噬细胞表现出与 MEF 细胞系不同的表型。这些结果表明，MEF 细胞系和巨噬细胞在除 p32 之外的线粒体相关分子的表达方面可能存在差异。研究结果已在日本临床检验医学会发表。 (3)代谢组分析制备小鼠代谢组分析用样品。分析定于明年进行。内容也预定以与上述相同的方式公布。

项目成果

ミトコンドリアDNA翻訳調節タンパク質p32の自然免疫系における機能解析

先天免疫系统中线粒体DNA翻译调节蛋白p32的功能分析

• 发表时间: 2013
• 作者: Masako Fujioka-Kobayashi;Hirokazu Nagai;Kanae Hara;Kenji Fujisawa;Youji Miyamoto;江尻寛子，鍬田龍星，伊澤晴彦，佐々木年則，津田良夫，林利彦，小滝徹，高崎智彦，小林睦生，沢辺京子;大迫英夫，吉岡健太，鍬田龍星，沢辺京子，原田誠也;星澤 早紀，後藤 和人，堀田多恵子，内海 健，康 東天
• 通讯作者: 星澤 早紀，後藤 和人，堀田多恵子，内海 健，康 東天

フローサイトメトリーFACSを用いた細胞内活性酸素測定系の構築

流式细胞术FACS细胞内活性氧测量系统的构建

• 发表时间: 2013
• 作者: Mineo Watanabe;Kyoko Murasaki;Kayo Horie;Naoto Hirose;Shinji Hiyama;Kotaro Tanimoto;Takashi Uchida;後藤 和人，星澤 早紀，堀田多恵子，内海 健，康 東天
• 通讯作者: 後藤 和人，星澤 早紀，堀田多恵子，内海 健，康 東天