人工多能性幹細胞を用いた先天性表皮水疱症の治療法の確立

诱导多能干细胞治疗先天性大疱性表皮松解症的方法的建立

• 批准号: 24890250
• 负责人: 伊藤 宗成
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890250/
• 关键词: 人工多能性幹細胞; 先天性表皮水疱症; 遺伝子治療

本研究では、人工多能性幹細胞（iPSC）を用いて、先天性表皮水疱症に対する新規の細胞・遺伝子治療の確立を目指している。当初の計画では、患者より分離培養した線維芽細胞からiPSCを作る予定であったが、皮膚が脆弱で、創傷治癒遅延が生じやすい先天性表皮水疱症患者から皮膚を採取するのは、侵襲が非常に大きく好ましくないと考え、より臨床応用に近づけた形で研究を進めるため、患者末梢血から分離培養したT細胞からiPSCを樹立することとした。まずコントロールとして健常人からのiPSCの樹立を行った。末梢血からT細胞を分離培養し増殖させたのち、センダイウイルスベクターを用いてリプログラム因子をT細胞に強制発現させた。2週間ほどでiPSCを思わせるコロニーが出現、選別して培養を行った。いくつかの細胞株の樹立に成功し、免疫染色により幹細胞マーカーの発現も確認された。現在、三胚葉への分化能など、iPSCとしての妥当性をさらに検証している。先天性表皮水疱症は稀な疾患なため、患者の収集にかなり苦慮したが、最近ようやく3名の栄養障害型先天性表皮水疱症（RDEB）患者から同意を得て、末梢血の採取、T細胞の分離培養を行った。現在はすでに遺伝子変異は判明している患者のT細胞からiPSCの樹立を行なっている。RDEB患者からiPSCが樹立できることを見越して、遺伝子治療を行う準備も行なっている。当初の計画ではNucleofectionによる相同組換えを行う予定だったが、相同組換え効率を上昇させるため、ある遺伝子改変システムの導入を決め、必要となるベクターや鋳型DNAの作製を進めている。また最終的に遺伝子治療を施したiPSCを皮膚由来細胞に分化させる必要があるため、健常人T細胞由来iPSCを用いて、表皮細胞への分化誘導実験も並行して進めている。本年度以降も引き続き本研究は継続していく予定である。

这项研究旨在使用诱导的多能干细胞（IPSC）建立新的细胞和基因疗法，以用于先天性表皮牛皮病。 The original plan was to produce iPSCs from fibroblasts isolated from patients, but it was thought that invasiveness was very undesirable to collect skin from patients with congenital epidermis bullopathy, which is prone to delaying wound healing, so in order to proceed with research in a way that is closer to clinical applications, we decided to establish iPSCs from T cells isolated and cultured from the patient's peripheral blood.首先，我们从健康人员中建立了IPSC作为对照。分离T细胞并从外周血和生长中培养后，将重编程因子被迫使用仙台病毒载体在T细胞上表达。大约两个星期后，让人联想到IPSC的菌落出现了，并且细胞进行了分类和培养。成功建立了几种细胞系，并通过免疫染色证实了干细胞标记的表达。当前，IPSC的有效性，包括它们分化为触发物的能力，得到了进一步验证。先天性表皮bull骨是一种罕见的疾病，因此很难收集患者，但最近，在三名营养不良的先天性表皮Bullosa（RDEB）的同意下，收集了外周血并分离并培养了T细胞。当前，IPSC是从已知基因突变的患者的T细胞中建立的。预计从RDEB患者建立IPSC，我们还准备进行基因治疗。最初的计划是使用核能进行同源重组，但是为了提高同源重组的效率，该公司决定引入遗传修饰系统，并继续创建必要的向量和模板DNA。此外，由于有必要先将IPSC分化为皮肤衍生的细胞，因此使用源自健康的人T细胞的IPSC并行进行实验，以诱导分化为表皮细胞。这项研究计划今年及以后继续进行。