体外より容易にその発症が制御可能な先天性表皮角化異常型水疱症のモデル動物の作製

建立体外易于控制发病的先天性大疱性表皮角化不良动物模型

基本信息

批准号：
09770630
负责人：
高橋健造
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、作製したガラクトシダーゼ遺伝子によるトランスジェニックマウスの発現組織分布の結果をふまえ、2.5kbpと5.0kbpのヒトケラチン6遺伝子のプロモーターをもちい、変異ケラチン遺伝子をトランスジェニックマウスの皮膚に誘導発現させた。この融合遺伝子を持つトランスジェニックマウスは、無刺激の状態では、全く正常な皮膚であるが、レチノイン酸などによる誘導をうけると表皮細胞に変異ケラチンを発現し、ヒトの遺伝病に見られるような病理像を呈した。このトランスジェニックマウスの解析のため以下の実験を行った。1)サザンブロット法によるトランスジェニックマウスの選定 2)HE、トルイジンブルー染色等によるトランスジェニックマウスの皮膚を中心にした全身の臓器の病理学的検索3)抗変異ケラチン抗体を用いた、全身臓器、正常および刺激後の皮膚での導入遺伝子発現の免疫組織学的検討 4)TPA,レチノイン酸、DMBAなどを皮膚に塗布した後の変異ケラチン遺伝子の誘導の度合の検討 5)2-4の実験の結果をふまえて、レチノイン酸とTPAを用い、薬剤による刺激後の、微細構造の経時的病理変化を電子顕微鏡を含めて検討した。今回、われわれは異常なケラチン蛋白質の発現がどのように、最終的には先天性表皮水疱症や魚鱗癬紅皮症の患者皮膚にみられるような表皮細胞の空胞化、トノフィラメントの塊状化、顆粒変性さらに表皮内水疱の形成といった病態や病理像を引き起こすのかをモデルマウスを使って詳しく解析し得た。生下時は全くの正常な皮膚を持ちながら、外部からの誘導により、ヒトの先天性皮膚疾患と同一の病理像を示すモデル動物を、トランスジェニックマウスの技術を用いて確立し、こうしてできたモデルマウスの病理組織像を詳しく観察することで、上記の皮膚疾患の発生機序がより明らかなり、さらにこのモデル動物は、よりよい治療法の探究のためにも極めて有用であると思う。

基于去年产生的半乳糖苷酶基因在转基因小鼠中表达的组织分布的结果，诱导突变的角蛋白基因在转基因小鼠的皮肤中表达，启动子为2.5 kbp和5.0 kbp human peratin 6基因。携带该融合基因的转基因小鼠在未刺激状态下具有完全正常的皮肤，但是当由视黄酸或类似诱导时，它们在表皮细胞中表达突变的角蛋白，从而显示出人类遗传疾病所见的病理特征。进行了以下实验以分析该转基因小鼠。 1）通过南方斑点选择转基因小鼠2）对整个身体器官的病理搜索，主要在转基因小鼠的皮肤中，使用He，甲苯胺蓝色染色等。3）3）对整个身体器官中转基因表达的免疫组织学检查正常的转基因表达，并在刺激后使用抗突变的keratin抗体，4）诱导的诱导剂，4）酸，DMBA等对皮肤5）根据实验2-4的结果，视黄酸和TPA的结果用于检查用药物（包括电子显微镜）刺激药物后时间随时间的病理变化。在本文中，我们能够详细分析异常角蛋白蛋白表达如何最终导致病理和病理特征，例如表皮细胞的真空化，质量的质量，颗粒状变性以及内部表皮上的水泡的形成，如浮球表皮表皮表皮外的皮肤所见，如有eRigersa和ichth的皮肤。通过在出生时建立具有完全正常皮肤的模型动物，使用外部诱导表现出与人类先天性皮肤疾病相同的病理图像，使用转基因小鼠的技术，并密切观察如此形成的模型小鼠的组织病理学形象，上述皮肤疾病发育的机制更加清晰，我认为这种模型动物对探索更好的治疗方法非常有用。